Реактивы и оборудование: этиловый спирт (этанол); формами д; метиловый спирт (метанол); н- гексан; бензол; NaOH, 0,05 н; диазореактив (ГФ X); изопсоралена и псоралена стандартный раствор (0,0025—0,0030 мг/мл в 95%-ном этиловом спирте).
Бумага хроматографическая марки «Б»; бюксы с притертыми крышками; набор сит; кофемолка; колбы с нормальным шлифом вместимостью 100 мл; стеклянные шарики; вибрационный аппарат, термостат; мерные колбы вместимостью 50 мл; фильтры стеклянные № 1; микропипетки измерительные вместимостью 1 мл; камеры хроматографические для БХ; химископ 4П-1; колбы конические вместимостью 25 мл; фотоэлектроколориметр ФЭК-М.
Методика количественного определения кумаринов в листьях инжира Folium Ficus caricae (ВФС42-878-79). Листья культивируемого кустарника или дерева смоковницы обыкновенной (инжира) (Ficus carica L) семейства тутовых (Moraceae) используются в качестве лекарственного сырья для получения препарата «Псо- беран», представляющего собой смесь псоралена и бергаптена. Количественное определение псоралена и бергаптена проводится хроматоспектрофотометрическим методом.
Около 5 г (с погрешностью до 0,01 г) листьев инжира, измельченных и просеянных сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм, помещают в коническую колбу с притертой пробкой вместимостью 250 мл; заливают 50 мл 60 %-ного водного ацетона и интенсивно встряхивают в течение 3 ч на вибрационном аппарате и настаивают 15 ч. Извлечение отфильтровывают через складчатый бумажный фильтр.
Стеклянную пластинку размером 13 X 18 см с незакрепленным слоем нейтрального оксида алюминия (II) делят на 4 части. На стартовую линию двух частей наносят в виде полосы по 0,1 мл полученного извлечения: на третью — 25 мл раствора стандартного образца псоралена (раствор А); четвертая часть служит фоном (контрольная проба) при спектрофотометрировании. Пластинку с нанесенными пробами высушивают на воздухе в течение 10 мин, а затем помещают в камеру с этиловым эфиром и хроматографируют восходящим методом. Когда фронт растворителя дойдет до конца пластинки, ее вынимают из камеры, сушат на воздухе до исчезновения запаха этилового эфира (1—2 ч) и просматривают в УФ свете при Я = 254 нм. Псоберан проявляется в виде голубого пятна на уровне пятна стандартного образца псоралена. Отмеченную зону сорбента с псобераном переносят в колбу со шлифом вместимостью 50—100 мл, заливают 20 мл 95 %-ного этилового спирта, закрывают пробкой и элюируют в термостате при t = 40—50 °С в течение 3 ч.
После охлаждения элюат отфильтровывают через воронку со стеклянным фильтром № 4 (элюат должен быть прозрачным) и определяют его оптическую плотность на спектрофотометре при длинах волн 246, 268 и 298 нм в кювете с толщиной слоя 1 см по отношению к элюату (95 %-ный этиловый спирт) с равным по площади оксидом алюминия, хроматографированного в тех же условиях без вещества (контрольная проба).
Параллельно при тех же длинах волн измеряют оптическую плотность раствора стандартного образца псоралена.
Процентное содержание псоберана х в пересчете на абсолютно сухую массу вычисляют по формуле
РхАУУуЮО • 100 х"а D„ml/i(100—w)'
где D1 — оптическая плотность испытуемого раствора при к = = 298 нм; D0 — оптическая плотность раствора стандартного образца псоралена при "К = 298 нм; А — концентрация раствора стандартного образца псоралена, г/мл; т — масса навески, г; V — общий объем извлечения, мл; V1 — объем извлечения, нанесенного на хроматограмму, мл; V2 — объем элюата, мл; w — потеря в массе сырья при высушивании, %.
Процентное содержание псоралена х в пересчете на абсолютно сухую массу вычисляют по формуле
(Р»«° —Dj">) ДУУг100-100
(024в_£>268) /ИК, (100 — W) '
где D*ie и Dfs — оптическая плотность испытуемого раствора при длинах волн 246 и 268 нм; D248 и D2m — оптическая плотность раствора стандартного образца псоралена при длинах волн 246 и 268 нм; А — концентрация раствора стандартного образца псоралена, г/мл; т — масса навески сырья, г; У — общий объем извлечения, мл; Vj — объем извлечения, нанесенного на хромато- грамму, мл; V2 — объем элюата, мл; w — потеря в массе сырья при высушивании, %.
Содержание псоберана не менее 0,7 %. Содержание псоралена не менее 0,42 %.
Приготовление стандартного образца псоралена. 0,05 г (точная навеска) стандартного образца псоралена (ВФС 42-532-76) растворяют при энергичном встряхивании в 95%-ном этиловом спирте в мерной колбе вместимостью 200 мл и доводят объем раствора тем же спиртом до метки (раствор А). 0,6 мл раствора А вносят в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят объем раствора 95%-ным этиловым спиртом до метки (раствор В). Раствор хранят в темноте в колбе с притертой пробкой. Срок хранения 6 мес 1 мл раствора стандартного образца содержит 0,000006 г псоралена
Приготовление 60% -ного водного раствора ацетона. Смешивают 600 мл ацетона и 400 мл воды.
Реактивы и оборудование: ацетон; А1(ОН)3; псорален; этиловый эфир; этиловый спирт (этанол).
Колбы с притертой пробкой вместимостью 250 мл, с нормальным шлифом вместимостью 100 мл; пластинки стеклянные для ТСХ размером 13 X 18 см; фильтры стеклянные № 4; бумага фильтровальная; термостат; спектрофотометры СФ-4А, СФ-6; УФ-лампа; колбы мерные вместимостью 25, 250 мл; камера хро- матографическая для ТСХ; весы лабораторные аналитические.
Вопросы ДЛЯ ПОДГОТОВКИ
