Схема патогенеза сальмонеллеза

4. Изучение бактериологической диагностики сальмонеллеза по схеме (записать в тетрадь)

Основным методом лабораторного исследования является бактериологический метод, основанный на выделении возбудителя. Кроме не­го используется серологический метод, с помощью которого определяют антитела в сыворотке больных людей.

При постановке бактериологического диагноза материалом для исследования служат промывные воды желудка, рвотные массы, кровь, моча, испражнения и материал, полученный на вскрытии. Пробы отбирают в стерильных условиях в стерильные банки с притертой пробкой, обертывают их плотной бумагой, обвязывают шпагатом и пломбируют. Собранный материал поставляют в лабора­торию, как можно быстрее, с сопроводительным документом и изучают его, независимо от количества и состояния.

Кровь исследуют с пер­вого дня болезни, её берут асептично из локтевой вены в объеме 10–20 мл и тут же у постели больного засевают во флаконы с элективной средой (среда Рапопорт или 20% желчный бульон) в объеме 100–200 мл. Так как при токсикоинфекциях период бактериемии ко­роткий, то этот материал исследуют в первые дни болезни.

Испражнения исследуют с первых дней болезни, для этого берут 3–5 г испражнений, помещают в пробирку с 30% глицериновой смесью и доставляют в лабораторию. Собранный материал встряхивают, эмульгируя его в консерванте, затем одну каплю эмульсии наносят на поверхность питательной среды и досуха втирают стеклянным шпателем на месте посева, а затем по всей поверхности.

Моча исследуется с первых дней заболевания. Мочу забирают стерильным катетером в стерильную посуду, сливают первую порцию, из оставшейся 20–30 мл наливают в центрифужные пробирки, центри­фугируют или отстаивают, осадок высевают на дифференциально-диагностичские среды и одну из сред обогащения.

Рвотные массы и промывные воды желудка забирают в стериль­ную посуду. Они, как правило, имеют кислую реакцию, поэтому пе­ред посевом их нейтрализуют 5–10% раствором бикарбоната натрия, 2–3 капли из верхнего слоя засевают на дифференциально-диагностические среды и среды обогащения.

Материал вскрытия: кусочки печени, селезенки, почек, кост­ного мозга, тонкого кишечника, а также кровь и желчь набирают стерильной пастеровской пипеткой, место введения пипетки предва­рительно прожигают раскаленным скальпелем. Кусочки органов берут стерильными ножницами и пинцетами, затем их растирают в стериль­ной ступке и высевают на дифференциально-диагностические среду и среду обогащения.

Каждый случай пищевой токсикоинфекции или внутрибольничного сальмонеллеза требует обязательного расследования, поэтому кроме бактериологического обследования больного, исследуют остатки пищи, полуфабрикаты и сырые продукты на обсемененность сальмонеллами. Пробы отбирают в стерильную посуду. Жидкие и полужидкие продукты тщательно размешивают, засевают по 2–3 капли на дифференциально-диагностические среды и среды обогащения. При исследовании твердых продуктов пробу берут из глубины в количестве 5–10 мл стерильным скальпелем или ножом, эмульгируют в изотоническом растворе хлорида натрия в соотношении 1:5 и засевают на дифференциально-диагностические среды и среды обогащения.

Дальнейшее исследование ведут в общей схеме исследования на сальмонеллез.

На второй день изучают колонии, выросшие на дифференциально-диагностических средах. На среде Эндо, Плоскирева сальмонеллы образуют бесцветные, блестящие, прозрачные колонии; на среде Вильсон-Блера блестящие, черные колонии, на месте снятых колоний остается черный след. Несколько подозрительных колоний выделяют на среде Олькеницкого, производя посев на скошенную поверхность и в глубину столбика.

Из селективных сред делают посев на чашки с дифференциально-диагностическими средами.

На третий день вынимают пробирки с посевами и изучают характер их роста. В состав среды Олькеницкого входят лактоза, глюкоза, сахароза, мочевина и индикатор. Глюкозы содержится в 10 раз меньше, чем других веществ, поэтому расщепление ее идет в анаэробных условиях, среда изменит цвет в столбике. Если выделенные культуры ферментируют лактозу и мочевину (среда изменяет цвет в столбике и скошенной поверхности), то это не сальмонеллы, выдается отрицательный ответ.

Для дальнейшего изучения отбирают культуры, ферментирующие только глюкозу. У выделенных культур изучают подвижность в висячей капле или в раздавленной капле, выявляют ферментативную активность на средах Гисса, пептонной воде, изучают морфологию в мазках, окрашенных по Граму и проводят анализ антигенной структуры в реакции агглютинации на стекле с поливалентной О- и монорецепторными сальмонеллезными О- и Н- сыворотками. Начинают идентификацию с реакции агглютинации на стекле с поливалентной О-сывороткой основных серологических групп В,С, Д, Е. При положительном результате культуру изучают с монорецепторными сыворотками, входящими в смесь, с каждой в отдельности, для установления серогруппы. Если результат с поливалентной сывороткой отрицательный, культуру испытывают с сывороткой к редким группам сальмонелл.

После установления серогрупп определяют вид культуры, сначала по Н-антигену первой фазы, а потом второй фазы, ставя реакцию агглютинации с монорецепторными Н-сыворотками.

Для реакций агглютинации используют культуры, выращенные на среде Олькеницкого, при этом для реакции агглютинации с О-сывороткой культуру берут из верхней части скошенного агара, a для агглютинации с Н-сыворотками из самой нижней части (конден­сационной воды)_, где возбудители наиболее подвижны. Установив антигенную структуру, по таблице определяют видвыделенной саль­монеллы. Для уточнения вида выделенных атипичных сальмонелл изу­чают дополнительные дифференциальные признаки – способность к валообразованию и биологическую пробу на белых мышах. Если культура по морфологическим, культуральным и фермен­тативным свойствам, а также антигенной структуре типична, то дают заключение об обнаружении сальмонелл с указанием серологического типа.

4. Знакомство с препаратами для специфической диагностики, профилактики и лечения сальмонеллеза (записать в тетрадь)

Бактериофаг сальмонеллезный групп АВСДЕ жидкий представляет собой фильтрат фаголизата нескольких типов наиболее распространенных сальмонелл. Применяется для лечения и профилактики сальмонеллезов.