Схема дифференциация Streptococcus и Enterococcus

Примечание: К – расщепление углеводов с образованием кислоты, (–) – отсутствие ферментации

6. Изучение схемы лабораторного диагноза пневмококковых инфекций по таблице (зарисовать)

Источником инфекции являются люди, у которых пневмококки обитают на слизистой дыхательных путей в норме или при различных заболеваниях. Главный фактор патогенности пневмококка является капсула полисахаридной природы. Пневмококки вызывают острую пневмонию у детей и взрослых. Способствуют развитию пневмонии предшествующие респираторные вирусные заболевания, патологическое скопление слизи и закупорка бронхов. Кроме того, пневмококки могут вызывать ползучую язву роговицы, отит, у маленьких детей они вызывают менингит, у части больных детей происходит генерализация процесса и возникает септицемия.

Для постановки лабораторного диагноза проводят микробиологическое исследование. Материал для исследования зависит от формы пневмококковой инфекции. Это может быть мокрота при пневмонии, отделяемое из язвы при ползучей язве роговицы или из уха при отите, спинномозговая жидкость при менингите, кровь при сепсисе, гной из абсцесса. Мокроту собирают в стерильные банки, лучше всего брать утреннюю мокроту. Перед откашливанием больной чистит зубы и полощет рот кипяченой водой, чтобы механически удалить остатки пищи, слущенный эпителий, микрофлору ротовой полости.

Отделяемое язвы или из уха берут стерильным тампоном, предварительно смочив его физиологическим раствором.

Гной из абсцесса собирают стерильным шприцем.

Кровь берут стерильным шприцем из локтевой вены в объеме 5–10 мл.

Материал доставляют в лабораторию. Интервал между взятием материала и его посевом не должен превышать 1–2 часов. Хранение материала способствует размножению сапрофитной флоры, развитию процессов гниения и брожения, что может исказить результаты анализа.

Основные методы микробиологическогоисследования:

- микроскопический;

- бактериологический;

- биологический

Микроскопический метод. Микроскопический метод основан на обнаружении возбудителя в мазках из исследуемого материала. Для этого из мокроты выбирают слизисто-гнойный комочек, растирают его на стекле, окрашивают по Граму и микроскопируют. Особенностью мокроты является обязательное наличие нескольких видов микроорганизмов, так как, проходя через верхние дыхательные пути и полость рта, мокрота может обсеменяться находящейся в них микрофлорой. В мазке видны скопления грамположительных, грамотрицательных кокков и палочек, как с капсулой, так и без нее, ланцетовидных диплококков, окруженных капсулой. Всегда можно обнаружить в мазке лейкоциты. Их отсутствие и большое количество эпителиальных клеток свидетельствует, что материал взят неправильно (с примесью слюны) и его нужно взять повторно. Спинномозговую жидкость, гной, пунктаты центрифугируют, из части осадка готовят мазки, окрашивают их по Граму. Иногда можно поставить диагноз при микроскопии материала. В мазке видны ланцетовидные грамположительные диплококки, окруженные капсулой. В спинномозговой жидкости, пунктатах часто пневмококк содержится в чистой культуре.

Бактериологический метод. Бактериологический метод основан на выделении пневмококка в чистой культуре.

В первый день исследования материал засевают на кровяной, сывороточный и шоколадный агар.

Так как пневмококки могут обитать в дыхательных путях и в норме, для оценки роли их в этиологии пневмонии проводят количественный посев. Для этого взятую мокроту гомогенизируют. Из полученного гомогенизата, готовят серию разведений в бульоне до 10⁷. Затем на кровяной и «шоколадный» агары высевают по 0,1 мл из разведений 10 ^-7 ,10 ^-5, 10^-3 и 10^-1.

Росту пневмококков способствует повышенное содержание углекислоты в окружающем воздухе. Приемы, позволяющие получить насыщение воздуха углекислотой, предложены разные. Они позволяют достигнуть от 5 до 20% углекислоты в воздухе. Чаще всего в лабораториях посевы помещают в эксикатор с горящей свечой и выдерживают в термостате при температуре 37 градусов 18–20 часов.

На второй день исследования изучают посевы. Сывороточный агар – колонии мелкие (диаметр до 1 мм) прозрачные, плоские с центральным углублением. «Шоколадный» агар – мелкие прозрачные колонии, окруженные зоной желтовато-зеленого альфа-гемолиза. Кровяной агар – мелкие плоские, прозрачные колонии, окруженные зеленящей зоной альфа-гемолиза. Из подозрительных колоний с зоной гемометаморфоза готовят мазки, окрашивают по Граму, исследуют под микроскопом. При наличии в мазках грамположительных диплококков оставшуюся часть колонии пересевают на кровяной агар для выделения чистой культуры, посевы помещают в термостат. При учете количественного посева изучают чашки с посевом материала в разведении десять в минус пятой степени. Это разведение является диагностическим.

На третий день после проверки чистоты культуры, окрашенной по Граму, проводят идентификацию выделенной культуры и дифференцируют ее от альфа-гемолитических стрептококков по чувствительности к желчи, оптохину и способности ферментировать инулин. Если выделенная культура ферментирует инулин, не растет на среде, содержащей оптохин (1:50000) и лизируется желчью, она относится к Str.pneumoniae (табл.13).

Определение серовара проводят в реакции агглютинации в пробирках с бульонной культурой и диагностической сывороткой в разведении 1:5 или в реакции ко-агглютинации на стекле, смешивая культуру, выросшую на кровяном агаре с диагностическим реагентом (культура стафилококка с адсорбированными на нем антипневмококковыми антителами). Наиболее часто от больных людей выделяют пневмококки I,II или III типов. О возбудителе судят на основании комплекса исследований: данные микроскопии первичных мазков, количественная оценка роста на плотных средах, учет анамнеза клинических проявлений и результаты терапии.

Таблица 13