| Разведение сыворотки Компоненты реакции, мл | |||||||
| 1:10 | 1:20 | 1:40 | 1:80 | 1:160 | Контроль сыворотки | Контроль антигена | |
| Физ. раствор | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | - | 0,5 |
| Сыворотка больного 1:5 |
 0,5
|
 0,5
|
 0,5
|
 0,5
|
 0,5
0,5 мл.
в дез.
р-вор
| 0,5Ви сыворотки | - |
| Эритроцитарный диагностикум | 0,25 | 0,25 | 0,25 | 0,25 | 0,25 | 0,25 | 0,25 |
7. Изучение этапов ранней диагностики брюшного тифа (метод гемокультуры) (оформить в тетради протокол)
10–20 мл стерильно взятой из локтевой вены крови засевают на 100–200 мл 10% желчного бульона или среды Рапопорт. Среда Рапопорт позволяет уже на второй день дифференцировать тифозные бактерии от паратифозных. Паратифозные бактерии разлагают глюкозу, входящую в состав среды Рапопорт с образованием кислоты и газа, которые обнаруживают при помощи «поплавков». Тифозные бактерии разлагают глюкозу только до кислоты.
7.1. Изучить характер роста на 10% желчном бульоне, в который накануне была засеяна кровь больного. Позже описания посевов из флакона сделать высев петлей на среду Эндо. Посевы поместить в термостат на сутки.
7.2. Изучить посевы на среде Эндо, описать выросшие колонии. Из бесцветных круглых выпуклых прозрачных колоний сделать пересев на среду Олькеницкого штрихом по скошенной поверхности и уколом в глубину столбика. Посевы поместить в термостат на 18–20 часов.
7.3. Изучить посевы на среде Олькеницкого. Для дальнейшего исследования отобрать только те пробирки, в которых среда посинела в столбике (ферментация глюкозы). Пробирки, в которых вся среда посинела (ферментация лактозы или сахарозы) или стала оранжевой (ферментация мочевины) из исследования исключить. Культуры, ферментирующие глюкозу до кислоты и не ферментирующие лактозу и сахарозу, подозрительны на сальмонеллы тифа. Культуры, ферментирующие глюкозу до кислоты и газа и не ферментирующие лактозу и сахарозу, подозрительны на паратифозные бактерии.
7.4. У подозрительных, как патогенные культуры, изучают антигенные свойства в реакции агглютинации с сальмонеллезными сыворотками.
а) для определения родовой принадлежности поставить реакцию агглютинации на стекле с поливалентной сальмонеллезной сывороткой АВСДЕ, содержащей антитела к антигенам наиболее часто встречающихся сальмонелл.
Для этого на предметное стекло нанести каплю сыворотки, рядом для контроля – каплю физиологического раствора. В обеих каплях, начиная с контрольной, размешать небольшое количество изучаемой культуры. Если в опытной капле наступает агглютинация, исследование продолжить дальше;
б) определение серогруппы. Определение серогруппы проводят в реакции агглютинации на стекле с монорецепторными сыворотками 0–2, 0–4, 0–6, 0–9, содержащими антитела к групповым О-антигенам. Для постановки реакции на предметное стекло нанести по капле монорецепторных сывороток 0–2, 0–4, 0–6, 0–9 и каплю физиологического раствора для контроля. Во всех каплях размешать петлей небольшое количество изучаемой культуры, прожигая петлю после каждой сыворотки.
Если в одной из капель (отметить в какой) наступит реакция агглютинации, исследования продолжить дальше.
в) определение серовара. Определение серовара проводят по жгутиковому антигену в первой фазе в пределах установленной серогруппы. На предметное стекло нанести каплю монорецепторной Н-сыворотки, для контроля – каплю физиологического раствора. В обеих каплях размешать немного культуры и наблюдать реакцию. Если реакция положительна, то по совокупности выявленных антигенов определить вид выделенной культуры по таблице и выдать ответ:
1. Если выделенная культура соответствует сальмонеллам по
биологическим и антигенным свойствам, выдать положительный ответ с указанием вида.
2. Если культура не агглютинируется ни видовыми, ни монорецепторными сыворотками, выдать отрицательный результат.
8. Изучение реакции Видаля (по выполненной работе оформить в тетради протокол)
Серодиагностика брюшного тифа может осуществляться через реакцию Видаля. Для постановки реакции Видаля получить сыворотку больного в основном разведении (1:50), из которого приготовить три ряда рабочих разведений от 1:100 до 1:800. В рабочие разведения первого ряда внести капли брюшнотифозного диагностикума, в рабочие разведения второго ряда внести по 2 капли паратифозного А диагностикума и в рабочие разведения третьего ряда внести по 2 капли паратифозного В диагностикума (см. схему постановки реакции Видаля, табл.8). Пробирки встряхнуть, поставить на 2 часа в термостат и до суток при комнатной температуре, после чего учесть результат (табл.9).
Результат: если агглютинация положительна, значит, в сыворотке есть антитела, а возбудителем считается тот микроорганизм, диагностикум из которого агглютинируется антителами сыворотки больного.
9. Знакомство с препаратами для специфической диагностики, профилактики и лечения брюшного тифа (записать в тетрадь)
Химическая сорбирования тифо-паратифозно-столбнячная вакцина (ТАВte) содержит выделенные из брюшнотифозной, паратифозных А и В бактерий, антигены и очищенный столбнячный анатоксин, адсорбированные на гидроокиси алюминия. Вакцина применяется для профилактики брюшного тифа, паратифов и столбняка лицам в возрасте от 15 до 50 лет, вводят ее строго подкожно.
Таблица 8
