Ћекции.ќрг


ѕоиск:




 атегории:

јстрономи€
Ѕиологи€
√еографи€
ƒругие €зыки
»нтернет
»нформатика
»стори€
 ультура
Ћитература
Ћогика
ћатематика
ћедицина
ћеханика
ќхрана труда
ѕедагогика
ѕолитика
ѕраво
ѕсихологи€
–елиги€
–иторика
—оциологи€
—порт
—троительство
“ехнологи€
“ранспорт
‘изика
‘илософи€
‘инансы
’ими€
Ёкологи€
Ёкономика
Ёлектроника

 

 

 

 


ќпределение содержани€ NO в супернатантах культуры фагоцитов in vitro

ќксид азота (NO) участвует во многих физиологических и патологических процессах на уровне как клеток, так и организма в целом, выполн€€ защитное, регул€торное и повреждающее действи€.

–егул€торное действие NO про€вл€етс€ в поддержании тонуса и проницаемости сосудов, в подавлении адгезии тромбоцитов, в модул€ции клеточной адгезии, нейротрансмиссии и бронходилатации, а также некоторых функций почек и иммунной системы.

ѕовреждающее действие оксида азота реализуетс€ через ингибирование ферментативных функций, индукцию процессов перекисного окислени€ липидов и повреждени€ ƒЌ  клетки, повышение чувствительности клетки к воздействию радиации, алкилирующих агентов и токсических металлов, а также через истощение антиокислительных возможностей клетки. Ќепр€мое цитотоксическое действие N0 осуществл€етс€ за счет модул€ции цитокинового равновеси€ и опосредованной (через »Ћ-12) активации NK-клеток и цитотоксических лимфоцитов. —ам по себе NO не €вл€етс€ мощным

 

цитотоксическим агентом, но может усиливать чувствительность клеток к действию других цитотоксических агентов. Ќаиболее выраженной антимикробной активностью обладают соединени€, образовавшиес€ при взаимодействии ј‘  и Nќ в случае их совместной генерации. ¬ результате взаимодействи€ NO с ј‘  и с некоторыми другими соединени€ми образуютс€ цитотоксические агенты, в том числе пероксинитрит (ONOO), S-нитрозотиолы (RSNO), нитрогендиоксид (ћЁ2), динитрогентриоксид (N2O3), динитроген-тетраоксид (N2O4) и железодинитрозильные комплексы (DNIC). ќднако Nќ может снижать эффективность окислительного взрыва за счет формировани€ железонитрильных комплексов, что уменьшает способность железа катализировать прооксидантные реакции.

Ёффекты NO прин€то раздел€ть на основные и опосредованные. ќсновные включают те реакции, в которых он непосредственно взаимодействует со специфическими биологическими молекулами, например с гуанилатциклазой, цитохромом –450 и др. ќпосредованные эффекты св€заны не с самим NO, а с реактивными формами азота, образующимис€ при взаимодействии NO с кислородом или с супероксидным анионом-радикалом.

ќсновные эффекты NO имеют место при низких концентраци€х NO (менее 1 мкM), тогда как побочные (включа€ образование радикалов) станов€тс€ возможными при более высоких концентраци€х NO (более 1мкћ).

ќксид азота in vivo образуетс€ с участием NO-синтазы (NOS), котора€ у млекопитающих существует в трех изоформах: nNOS - нейтральна€ (тип 1); iNOS - индуцибельна€ (тип 2); ecNO-синтаза - эндотелиальна€ (тип 3).

¬ макрофагальных клетках функционирует iNOS, экспрессию которой стимулируют некоторые цитокины и микробные продукты, часто действующие в синергизме. NOS типов 1 и 3 называют также cNOS - избирательна€, котора€ присутствует в клетках и может быть активирована притоком кальци€ с последующим его св€зыванием с кальмодулином. ¬ присутствии iNOS оксид азота вырабатываетс€ в больших количествах и часто дает побочные эффекты, такие, как перекисное окисление липидов и гидроксилирование, образование нитрозаминов и нитротирозина.

 

јктивированный на цитохроме р450 кислород включаетс€ в реакцию образовани€ NW-OH-L-аргинина и €вл€етс€ участником одного из наиболее важных этапов в зависимой от NOS-реакции -

окислении гуанидинового азота. «атем гидроксилированна€ форма L-аргинина при участии супероксидных анион-радикалов и гема превращаетс€ в L-цитруллин с одновременным образованием NO.

ƒл€ оценки продукции NO перитонеальными макрофагами животных или моноцитами периферической крови человека определ€ют содержание нитрит-аниона (NO2-) в супернатанте культивируемых клеток (см. Ћабораторную работу 3-5) спектрофотометрическим методом с использованием реактива √рисса. ƒл€ этого 150 мкл культуральной среды перенос€т из лунки планшета в пробирку и добавл€ют последовательно 75 мкл 1,5% раствора сульфаниламида и 1N HCl и 75 мкл 0,15% раствора нафтилэтилендиамминдихлорида в дистиллированной воде (компоненты реактива √рисса). «атем довод€т объем раствора до 1 мл. ѕосле инкубации в течение 10 мин анализируют оптическую плотность раствора на спектрофотометре (например, на —‘-46) при 540 нм, использу€ в качестве контрол€ полную среду культивировани€ с добавлением раствора √рисса. ѕродукцию NO выражают в микромол€х при помощи калибровочного графика.



<== предыдуща€ лекци€ | следующа€ лекци€ ==>
ќписание метода люминолзависимой хемилюминесценции | ќпределение активности миелопероксидазы в лейкоцитах периферической крови
ѕоделитьс€ с друзь€ми:


ƒата добавлени€: 2015-02-12; ћы поможем в написании ваших работ!; просмотров: 307 | Ќарушение авторских прав


ѕоиск на сайте:

Ћучшие изречени€:

Ќаглость Ц это ругатьс€ с преподавателем по поводу четверки, хот€ перед экзаменом уверен, что не знаешь даже на два. © Ќеизвестно
==> читать все изречени€...

2247 - | 1878 -


© 2015-2024 lektsii.org -  онтакты - ѕоследнее добавление

√ен: 0.011 с.