Для обнаружения кумаринов в растительном сырье используют их лактонные свойства,
- вступать в реакцию разрыва лактонного кольца (лактонная проба);
- давать окрашенные растворы с диазосоединениями;
- флуоресцировать в УФ-свете.
Лактонная проба (предложена Г.А-Кузнецовой).
Реакция проводится c контрольным опытом.
Извлечение, содержащее кумарины, наливают в две пробирки.
В одну из них добавляют несколько капель 10%-ного раствора натрия гидроксида. Обе пробирки нагревают на водяной бане, затем в обе прибавляют 5 мл дистиллированной воды и хорошо перемешивают.
Если в пробирке, куда добавляли щелочь, раствор остался желтым и прозрачным, значит реакция положительна, так как образуется желтая растворимая в воде соль кумаровой кислоты.
В контрольной пробирке при добавлении воды раствормутнеет, кумарины не растворяются в воде и выпадают в осадок.
При подкислении щелочного раствора лактонное кольцо замыкается и кумарины выпадают в осадок.
Реакция образования азокрасителя.
Реакция проводится с продуктами, полученными после разрыва лактонного кольца.
В пробирку добавляют несколько капель свежеприготовленного диазореактива.
Чаще всего в качестве диазореактива используют диазосульфаниловую кислоту. Образуется краситель от желтого до вишнево-красного цвета.
3. Для идентификации кумаринов используют методы бумажной и тонкослойной хроматографии.
При этом используют системы растворителей;
- н-гексан-бензол-метанол (5:4:1);
- петролейный эфир-бензол-метанол (5:4:1);
- н-бутанол-уксусная кислота-вода (4:1:5).
Идентифицируют кумарины по характерной флюоресценции в УФ свете или проявляют хромогенными реактивами. В качестве проявляющих реактивов служат 1%-ный спиртовый раствор алюминия хлорида, 10%-ный раствор щелочи или пары аммиака.
Широкие возможности для обнаружения в растениях и сырье кумаринов, не только их суммы, но и отдельных соединений, открылись после внедрения хроматографического анализа. При этом указанные реактивы используют и для обработки хроматограмм.
4. Хроматографические методы удобны для выделения индивидуальных кумаринов.