Методические указания к выполнению задания 47

Метод иммуноэлектрофореза чувствительный и специфичный, позволяет выявить и различить вещества-антигены, содержащиеся в многокомпетентной системе и в низких концентрациях.

Иммуноэлектрофорез основан на сочетании двух методов – электрофореза и преципитации в геле, техника постановки включает 2 этапа:

1. Исследуемое вещество (антиген) разделяют при помощи электрофореза в геле на составные компоненты, обладающие различной электрофоретической подвижностью. Для этого расплавленный агаровый гель наливают на стеклянную пластинку, после застывания в центре делают лунку, в которую вносят испытуемое вещество, затем пластинку помещают в аппарат для электрофореза. Отдельные компоненты исследуемого вещества распределяются по оси миграции в разных зонах и могут быть выявлены с помощью специальной окраски.

2. Проводят реакцию преципитации в геле, добавляя в тот же гель иммунную сыворотку (по окончании электрофореза), для этого параллельно оси миграции вырезают канавки в геле и заливают в них иммунную сыворотку. Антитела и разделенные электрофорезом антигенные компоненты диффундируют в геле навстречу друг другу, встречаются и образуют нерастворимые преципитаты, имеющие вид дуг различной кривизны и расположения. При этом каждый антиген реагирует отдельно со своим гомологичным антителом и дает независимую дугу.

Клиническое значение. Метод иммуноэлектрофореза позволяет определять число антигенных компонентов исследуемого материала, идентифицировать их по электрофоретической подвижности и по характеру дуг преципитации со специфической сывороткой.

Иммунофлюоресцентный метод

Позволяет сочетать иммунологические и серологические исследования, а также сочетать морфологические исследования с серологическими. С его помощью удается быстро (за 1–2 ч) обнаружить различные микробные антигены (бактерий, риккетсий, вирусов и др.) или антитела, определять их точное нахождение в тканях и органах. Метод диагностики основан на взаимодействии антигенов со специфическими антителами, меченными флюорохромными красителями. С помощью люминисцентного микроскопа эти антигены (связанные с антителами) выявляются в виде светящихся изображений на несветящемся фоне препарата.

При проведении микробиологических исследований применяют прямой и непрямой методы иммунофлюоресценции. Метод применяется в качестве диагностического экспресс-метода при многих инфекционных заболеваниях в практической микробиологии и вирусологии.