Феномен прецепитации – эффект укрупнения растворимых антигенных субстанций (преципитиногенов) под влиянием антител (преципитинов) с возникновением помутнения прозрачных растворов.
Выпадение нерастворимого комплекса антиген + антитело в виде осадка наблюдается лишь при эквивалентных соотношениях ингредиентов. Реакция преципитации служит для выявления антигена по известной преципитирующей сыворотке, содержащей антитела; сыворотку получают иммунизацией животных соответствующим антигеном.
А. Для постановки реакции кольцепреципитации в узкие пробирки диаметром 0,5 см наливают по 0,1 мл диагностических сывороток против различных антигенов микробного или иного происхождения (число пробирок по числу имеющихся ингредиентов), а затем осторожно по стенке пробирок наслаивают пастеровской пипеткой изучаемый материал. Учет реакции производят через 1–2 мин. В случае положительной реакции на границе между сывороткой и исследуемым материалом появляется преципитат в виде белого кольца. В контролях преципитата нет.
Б. Реакция преципитации в геле позволяет проводить анализ сложного набора растворимых антигенов или преципитирующих антител в испытуемых системах. Принцип метода заключается в том, что антиген и антитело, реагируя в геле, образуют преципитат, который проявляется в виде линии белого цвета. Каждая пара антиген + антитело образует независимую линию преципитации, что позволяет сравнивать антигенный состав испытуемых веществ.
В зависимости от техники постановки различают:
1. Метод простой (одинарной) диффузии, при котором готовится слой агарового геля, смешанный с иммунной сывороткой, и в лунку, сделанную в этом слое, вносится антиген.
2. Метод двойной диффузии по Оухтерлони, при котором антигены и антитела вносятся в разные лунки агарового геля и, диффузируя в среду, встречаются, образуя линии преципитата. Для постановки реакции по данному методу чашки заливают просветленным агаром, в котором делают лунки на равном расстоянии друг от друга.
3. В центральную лунку вносят антитела, в лунки по периферии – испытуемые антигены или один и тот же антиген в различных разведениях. Чашку закрывают крышкой и оставляют опыт при комнатной температуре на 24–28 ч.
Возможны следующие виды результатов:
1. Реакция идентичности: полосы преципитации, образованные антигенами «А» и «В» и антисывороткой, сливаются друг с другом – сравниваемые антигены серологически тождественны.
2. Реакция неидентичности: полосы преципитации перекрещиваются – сравниваемые антигены серологически различны.
3. Реакция частичной идентичности: полосы преципитации в основном сливаются, но образуют остаток («шпора»), что указывает на содержание антител как к общим детерминантам сравниваемых антигенов, так и к детерминантам, отсутствующих у одного из них.
Задание 45. Поставить РСК с сывороткой обследуемого больного:
| Ингредиенты, мл | Пробирки | ||||||
| Испытуемая сыворотка, 1:5 | 0,2 | – | – | 0,2 | – | – | – |
| Положительная сыворотка | – | 0,2 | – | – | – | – | – |
| Отрицательная сыворотка | – | – | 0,2 | – | – | – | – |
| Антиген | 0,2 | 0,2 | 0,2 | – | 0,2 | – | – |
| Физиологический раствор | – | – | – | 0,2 | 0,2 | 0,4 | 0,8 |
| Комплимент | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | 0,2 | – |
| Инкубация при 37 °С – 30 мин | |||||||
| Гемолитическая система | 0,4 | 0,4 | 0,4 | 0,4 | 0,4 | 0,4 | 0,4 |
| Инкубация при 37 °С – 30 мин | |||||||
| Результат | |||||||
| Заключение: Объяснить результаты, полученные в каждой из 7 пробирок: - почему произошел или не произошел лизис эритроцитов; - на основании каких данных судят о положительной или отрицательной реакции. |
Задание 46. Постановка реакции коагглютинации по схеме:
| Получают взвесь выделенной культуры | Вносят штамм Cowan-1 | Положительная агглютинация говорит о хронической инфекции |
