Глава 1 Дыхание бактерий
Как известно, атмосферный воздух содержит приблизительно 78 % азота, 20 % кислорода и 0,03—0,09 % углекислого газа. Газообразный азот используется только азотфиксирующими бактериями, СО2— единственный источник углерода — утилизируется литотрофними бактериями. Кислород играет очень важную роль в метаболизме большинства видов бактерий.
Дыхание бактерий — это сложный процесс, который сопровождается выделением энергии, нужной микроорганизмам для синтеза разных органических соединений.
Процессы дыхания у бактерий являются длинной цепью последовательных окислительно восстановительных реакций с участием многих ферментативних систем, которые осуществляют перенесение электрона от системы с наибольшим негативным потенциалом к системе с наибольшим позитивным потенциалом. При постепенном и дробному высвобождении энергии дыхания и при промежуточном перенесении водорода повышается активность реакции клетки. Представление о дыхании как процесс биологического окисления органических веществ кислородом испытало значительных изменений в связи с открытием анаэробных бактерий, которые не могут существовать в присутствии кислорода. Л. Пастер доказал, что энергия, нужная для жизнедеятельности некоторых видов бактерий, образуется в процессе брожения.
Все бактерии по типу дыхания разделяются на облигатные аэробы, микроаэрофилы, факультативные анаэробы и облигатные анаэробы.
Глава 2 Принципы и методы выделения чистых культур бактерий
Бактериологическое исследование
Бактериологический метод исследования является важнейшим в практической деятельности любой микробиологической лаборатории. От правильного его выполнения зависит определение этиологического фактора, который вызывал заболевание, и, соответственно, выбор тактики лечения инфекционного больного. Важность этого метода объясняется тем, что во многих случаях врачи имеют дело с микробными ассоциациями, тогда необходимо устанавливать роль каждого из микробов в возникновении болезни.
Потому перед освоением основных принципов и методов выделения чистых культур необходимо овладеть техникой посевов и пересеваний бактерий в жидких и на плотные питательные среды.
Техника посевов микроорганизмов. Посевы проводят как с целью выделение возбудителей из исследуемого материала от больных, так и для нагромождения чистых культур с целью последующего их изучения и идентификации. Техника посевов в жидких и на плотные питательные среды имеет свои особенности.
В левую руку берут две пробирки. В одной находится питательная среда (плотное или жидкое), в другой – исследуемый материал. Пробирки зажимают большим и указательным пальцами. Для того, чтобы можно было наблюдать за содержанием пробирок, их держат сверху кисти руки. Пробирки должны быть кое-что наклоненными, и нужно следить, чтобы при открытии их материал или посторонние микробы зповитря и окружающих предметов из одной не попали в другую. Пробки из пробирок вынимают, держа их 4 и 5 пальцами правой руки. Тремя другими пальцами правой руки, как карандаш, держат бактериологическую петлю или пипетку, которыми распределяют исследуемый материал.
Сначала стерилизуют петлю в верхней части пламени газовой горелки. Пробирки открывают и край их проносят через пламя горелки. Петлю опускают в пробирку, где есть исследуемый материал, и, осторожно касаясь стенки, охлаждают. В последующем петлю опускают в пробирку и набирают материал. Если он находится в жидком состоянии, для посева достаточно капли жидкости, которая задерживается в кильке бактериологической петли. Когда используют микробов, которые выросли на поверхности среды, осторожно плавным движением набирают небольшое количество их, следя, чтобы не повредить питательную среду. Петлю медленно вынимают из пробирки, не касаясь ее стенок, и переносят в другую пробирку со средой. Штриховыми движениями от одной стенки пробирки к другой, начиная с нижней части среды, проводят занял материалу по скошенной поверхности агара снизу кверху.
Петлю вынимают из пробирки, пробки и края пробирок проносят через пламя и закрывают. Петлю прожаривают в пламени, чтобы уничтожить микроорганизмы.
При посеве материала на жидкую питательную среду петлю с материалом окунают в жидкость. Если он не снимается из петли, его осторожно растирают на стенке пробирки и омывают средой.
Материал, который набирали пастеровской или градуированной пипеткой, выливают в питательную среду, а для равномерного распространения его пробирку осторожно, чтобы не замочить пробку, стряхивают или вращают, зажав в ладонях.
Для посева материала на плотную питательную среду в чашках Петри небольшое количество материала набирают стерильной петлей и втирают в поверхность среды возле края чашки.
