Цель: освоить методику испытания противомикробной активности антисептика профилактического назначения.
Материалы:
Стерильные чашки Петри – 8 шт., чашка Петри с 10-15 мл взвеси тест-культуры E. coli плотностью 109 КОЕ/мл., пробирки с 10 мл 1% пептонной воды – 8 шт., пробирки с 4,5 мл 1% пептонной воды – 32 шт., чашки с МПА – 8 шт., стерильные пипетки на 1-2 мл – 32 шт., пастеровские пипетки – 8 шт.
Методика:
I этап:
1. Вымыть руки теплой водой с туалетным мылом (2 минуты). Высушить руки на воздухе.
2. Контаминировать кожу 2-х дистальных фаланг указательного, среднего и безымянного пальцев одной руки взвесью E. coli плотностью 109 КОЕ/мл путем погружения на 10 сек. в чашку Петри с культурой. Высушить контаминированные пальцы на воздухе.
3. Провести смывы с контаминированных пальцев руки в чашке с 10 мл 1% пептонной воды путем втирания в дно чашки (контроль).
4. Выполнить обработку кожи рук антисептиком путем тщательного втирания 3 мл препарата в кожу в течение 30 секунд.
5. Провести смывы с контаминированных фаланг пальцев руки в чашке с 10 мл 1% пептонной воды путем втирания в дно чашки (опыт).
6. Выполнить посевы смывов (рис. 8).
0,5 мл смывной жидкости из чашки Петри перенести в пробирку с 4,5 мл 1% пептонной воды и далее приготовить разведения от 10-1 до 10-4.
Все разведения смывов посеять по 0,05 мл на соответствующие сектора чашек Петри с МПА.
II этап:
9. Подсчитать количество колоний на секторах чашек.
10.Определить концентрацию жизнеспособных бактерий (КОЕ/мл) в контрольных и опытных высевах и десятичные логарифмы числа выживших микробов.
Формула для определения концентрации жизнеспособных бактерий (КОЕ/мл):
N=n×20 ×10x,
где: n – число колоний на питательной среде; 20 – коэффициент перерасчета посевного объема; 10х – фактор разведения.
11.Рассчитать фактор редукции (разница между десятичными логарифмами КОЕ/мл в контроле и опыте).
Примеры расчета показателей:
Число колоний на секторе «10-4» в контроле 5 шт., КОЕ/мл – Nк=5×20×104=1 ×106; десятичный логарифм – lnк=6,0.
Число колоний на секторе «10-1» в опыте 4 шт., КОЕ/мл – Nо=4×20×101=0,8×103; десятичный логарифм – lnо=3,9
RF (фактор редукции) = lnк- lnо= 6,0-3,9=2,1 ln
Значения десятичных логарифмов чисел определяются по таблицам или с помощью калькулятора.
Для гигиенической антисептики активность препаратов (величина фактора редукции) по отношению к тест-культуре E. coli должна составлять > 4,0 ln.
Чашка Петри со 0,5 мл 0,5 мл 0,5 мл
смывной жидкостью
0,5 мл 10-1 10-2 10-3 10-4
0,05 мл
 | |||
 | |||
МПА
Рис. 8. Схема выполнения посевов при испытании противомикробной активности антисептика профилактического назначения
