Липопротеиды – это транспортные формы липидов и других гидрофобных соединений. ЛП – это сферические частицы с гидрофильной оболочкой, образованной фосфолипидным монослоем, апобелками и свободным холестерином, гидрофобным ядром, состоящим из эфиров холестерина и ТАГ. В крови присутствует 4 основных класса ЛП: хиломикроны, липопротеины очень низкой плотности, липопротеины низкой плотности, липопротеины высокой плотности и множество промежуточных форм.
· Хиломикроны – наиболее крупные липопротеиды. Содержат 98-99 % липидов и 1-2 % белка. Они образуются в клетках слизистой оболочки кишечника и обеспечивают транспорт липидов из кишечника в лимфу, а затем в кровь. Хиломикроны распадаются под действием фермента липопротеидлипазы. Кровь содержащая большое количество хиломикронов называется хилезной.
· Липопротеиды очень низкой плотности ЛПОНП (бетта-липопротеины)– 7 - 10 % белка, 90-93 % липидов. Они синтезируются в печени и содержат 56 % ТАГ и 15 % холестерина от общего количества липидов. Основное назначение – транспорт ТАГ из печени в кровь.
· Липопротеиды низкой плотности ЛПНП (бетта-липопротеины) – количество белка 9-20 %, липидов 91-80 %. Среди липидов преобладают холестерин и ТАГ (до 40 %). Образуются в кровотоке из ЛПОНП под действием липопротеидлипазы. Основное их назначение – транспорт холестерина в клетки органов и тканей. Разрушаются в лизосомах клетки.
· Липопротеиды высокой плотности ЛПВП (альфа-липопротеины) – белка 35-50 %, липидов 65-50 %. Липиды представлены холестерином и фосфолипидами. Это самые мелкие из липопротеидов. Образуются в печени в «незрелом виде» и содержат только фосфолипиды, затем поступают в клетки тканей и «забирают» холестерин из клетки. В «зрелом» виде поступают в печень, где разрушаются. Основное назначение – удаление избытка холестерина с поверхности клеток.
Изменение содержания липидов в крови называется дислипидемией. Эти изменения чаще всего выражаются в увеличении количества липопротеидов – гиперлипопротеидемия. Существует классификация гипрелипопротеинемий, согласно которой различают 5 классов ГЛП:
I тип – гиперхиломикронемия (ХМ)
IIа тип - гипер –в- липопротеинемия (ЛПНП)
IIб тип – гипер-в и гиперпре-в-липопротеинемия (ЛПНП) и (ЛПОНП)
III тип – дис-в-липопротеинемия (измененных ЛПНП)
IV тип – гипер-пре-в-липопротеинемия (ЛПОНП)
V тип - гипер-пре-в-липопротеинемия и гиперхиломикронемия - (ЛПОНП), (ХМ). Наиболее атерогенными являются II и III типы, так как приводят к накоплению в плазме крови холестеринсодержащих ЛП.
Задание для самостоятельной работы:
· Законспектируйте методику;
· Подготовьте рабочее место для исследования;
· Проведите определение содержания липопротеидов в предложенной сыворотке;
· Оцените полученные результаты;
· Сделайте выводы по работе и рисунки;
· Ответьте на дополнительные вопросы.
Ответьте на вопросы:
1. Какая основная функция липопротеидов?
2* Каким методом можно разделить липопротеиды на фракции и по какому принципу? Приведите их классификацию.
2. Что такое хиломикроны? Где и как они образуются?
3. Что обозначает термин «хилезная» кровь?
4. Какие липопротеиды крови являются атерогенными (антиатерогенными)? Почему?
6*. Назовите биохимические причины и факторы риска для развития атеросклероза.
Практическая работа
6.4. Определение содержания ТАГ в сыворотке крови ферментативным методом.
Цели занятия:
- Усвоить представления о диагностическом значение определения содержания липидов и их фракций;
- Знать строение, синтез и распад ТАГ, диагностическое значение определения ТАГ в сыворотке крови;
- Уметь проводить определение ТАГ в предложенной сыворотке крови.
Принцип: триацилглицериды при воздействии ряда ферментов дают образование хинонимина. Концентрация хинонимина, определяемая фотометрически, пропорциональна концентрации ТАГ в пробе.
| Реактивы: 1. Буферный раствор рН=7.5 2. Лиофилизат. 3. Стандартный раствор-2.85ммоль/л 4. Вода дистиллированная. 5. Сыворотка или плазма | Оборудование: 1. Пробирки – 3 шт. 2. Фотоколориметр. 3. Кюветы на 5 мм. 4. Пипетки на 2 мл, 5. Дозаторы на 0.02 мл. |
Подготовка реактивов:
Растворите содержимое флакона 2 (лиофилизат) в 50 мл раствора 1 (буфер), выдержите при комнатной температуре 20-30 минут. Полученный реагент стабилен 30 дней при 2 - 4оС. реагент 3 готов к работе. Плотно закрывать флаконы сразу же после использования!
Ход определения:
| Реактивы. | Опыт, мл | Калибровка, мл | Контроль. Мл |
| Сыворотка | 0.02 | - | - |
| Вода дист. | - | - | 0.02 |
| Рабочий реагент | 2.0 | 2.0 | 2.0 |
| Стандартный раствор | - | 0.02 | - |
Реакционную смесь тщательно перемешивайте и инкубируйте при комнатной температуре не менее 5 минут. Измерьте оптическую плотность опытной и калибровочной пробы против контрольной в кюветах с длиной оптического пути 5 мм при длине волны 505 нм. Окраска стабильна не менее 1 часа после окончания инкубации при предохранении от прямого солнечного света.
Расчет:
С = (Ео/Ест* 2.85) – 0.11 ммоль/л
Нормальные величины: 0.55 – 1.65 ммоль/л
