Аминотрансферазы: аспартат- и аланинаминотрансферазы осуществляют весьма важную функцию – обратимый перенос аминогрупп с аминонокислот на кетокислоты. Содержатся во всех клетках человеческого организма (больше всего в ткани печени, мышцах сердца, скелетной мускулатуры, почках).
Активность АсАТ преобладает в мышечной ткани, а АлАТ – в печени.
Пределы колебаний активности ферментов в сыворотке крови у взрослых составляет: АсАТ – 0.1 – 0.45 мкмоль/л*ч,
АлАТ – 0.1 – 0.68 мкмоль/л*ч
Наиболее часто активность аминотрансфераз исследуют с целью дифференциальной диагностики патологии печени и миокарда. Увеличение активности аминотрансфераз наблюдается при:
· Инфаркте миокарда активность АсАТ в 95% случаев повышается (активность КК, ЛДГ при этом повышена). Возрастание происходит на 4-6 ч. с момента приступа. Оно четко выражено спустя 24-36 ч. (увеличивается в 4-5 раз выше нормы) и лишь на 3-7 сутки снижается до нормы. Отношение показателей активностей КК/АсАТ имеет высокую значимость при дифференциальной диагностике инфаркта миокарда(отношение около 5) и поражениях скелетных мышц(около 27). Коэффициент де Ритиса АсАТ/АлАТ более 1.
· Остром вирусном гепатите (АлАТ и АсАТ более чем в 100 раз). Коэффициент де Ритиса менее 1,33.
Быстрое снижение активности аминотрансфераз одновременно с возрастанием гипербилирубинемии свидетельствует об обширных некротических изменениях в ткани печени. В благоприятных ситуациях гепатита активность данных ферментов снижается медленно в течение нескольких недель и даже месяцев.
· Хроническом гепатите;
· Циррозе печени (активность повышается в 5-8 раз);
· Механической желтухе (АлАТ повышается в 50 раз долго остается повышенной, сопровождаясь возрастанием активности ЩФ, ГГТП и содержанием билирубина);
· Токсическом поражении печени;
· Легочной эмболии (активность КК при этом не повышена);
· Пораженияхмышц (мышечной дистрофии, дерматоитозит);
Снижение активности АсАТ и АлАТ наблюдаются при:
· Снижении содержания в организме витамина В6
· Почечной недостаточности.
Задание для самостоятельной работы:
· Законспектируйте методику;
· Подготовьте рабочее место для исследования;
· Проведите определение активности аминотрансфераз в предложенной сыворотке;
· Оцените полученные результаты;
· Сделайте выводы по работе и рисунки.
· Ответьте на дополнительные вопросы.
Ответьте на вопросы:
1. К какому классу ферментов относятся АлАТ и АсАТ?
2*. Напишите уравнение реакции, которую катализирует АлАТ.
3. Назовите место локализации АлАТ и АсАТ.
4. Что такое коэффициент де Ритиса, как его рассчитывают, что он характеризует.
10. Назовите основные заболевания, при которых изменяется активность аминотрансфераз. Объясните причину.
6*.Назовите, какие еще ферменты изменяют свою активность при заболеваниях сердца; печени?
Практическая работа.
Определение активности кислой и щелочной фосфатаз в сыворотке крови.
Цели занятия:
- Усвоить представления о диагностическом значении определения ферментов;
- Знать изоферменты, клинико-диагностическое значение определения фосфатаз в сыворотке крови;
- Уметь определять активность кислой щелочной фосфатазы в сыворотке крови;
Принцип метода: принцип определения активности фосфатаз основан на способности ферментов, отщеплять неорганический фосфат от нитрофенил-фосфата в щелочной среде.
| Реактивы. 5. Буфер, рН=10,4. 6. 4-нитрофенилфосфат. 7. NaOH 0.4 ммоль/л 8. Сыворотка. | Оборудование. 6. ФЭК, кювета на 10 мм. 7. Термостат. 8. Пробирки – 2 шт. 9. Пипетки на 1 и 5 мл. 10. Дозатор 0,02 мл. |
Ход определения.
| Реактив. | Опыт. | Контроль. |
| Рабочий реактив. | 1,0 | 1,0 |
| Сыворотка. | 0,02 | - |
| Перемешать, проинкубировать в течение 20 минут при 300С в термостате. | ||
| NaOH | 5,0 | 5,0 |
Перемешать и измерить оптическую плотность опыта (Д) против контроля в кюветах на 10 мм, при длине волны 405 нм.
Расчет результатов:
ЩФ, МЕ/л = Д * 812.
Нормальные величины: 30 –90 МЕ/л.
