(диацетилмонооксимный метод)
ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ. Мочевина - продукт, образующийся в печени при обезвреживании аммиака. Мочевина – основной конечный продукт обмена белков. Примерно 50% небелкового, остаточного азота крови приходится на долю мочевины.
ПРИНЦИП МЕТОДА: мочевина образует с диацетилмонооксимом в сильнокислой среде в присутствии тиосемикарбазида и ионов трехвалентного железа комплексное соединение красного цвета, по интенсивности окраски которого определяют ее концентрацию.
ХОД РАБОТЫ: взять три пробирки: опыт, стандарт, контроль.
| ОТМЕРИТЬ | ОПЫТ | СТАНДАРТ | КОНТРОЛЬ |
| Рабочий раствор Сыворотка крови Дистилл. вода Стандартный раствор мочевины (16,65 ммоль/л) | 2,0 мл 0,1 мл - - | 2,0 мл - - 0,1 мл | 2,0 мл - 0,1 мл - |
Все пробирки поместить в водяную баню при температуре 100оС в течение 5 минут.
Охладить и произвести измерение экстинкции против контроля при 500-560 нм; кювета 5 мм. Измерения проводят в пределах 15 минут.
РЕЗУЛЬТАТ:
Еоп =;
Ест =;
Сст = 16,65 ммоль/л.
КОНЕЧНЫЙ РЕЗУЛЬТАТ: рассчитывают по формуле:
Еоп
Соп = ----- · 16,65 = ммоль/л.
Ест
КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.
Нормальное содержание мочевины в сыворотке крови у взрослых 2,5 - 8,33 ммоль/л; в моче 333 - 582 ммоль/сут. У новорожденных в сыворотке крови нормальное содержание мочевины составляет 3,5 – 11 ммоль/л, у детей 2-14 лет 2,5 – 8,33 ммоль/л.
Незначительное повышение концентрации мочевины в сыворотке крови наблюдается при избыточном питании белковыми продуктами, при старении.
Значительное увеличение концентрации мочевины в сыворотке крови (уремия) наблюдается при почечной недостаточности, обезвоживании (рвота, понос), шоке, усиленном распаде белков, сепсисе.
Пониженное содержание мочевины в сыворотке крови отмечается при паренхиматозном гепатите, циррозе (резкое снижение мочевинообразовательной функции печени), эклампсии, во время беременности.
Пониженное содержание мочевины в моче отмечается при нефрите, ацидозе, паренхиматозной желтухе, циррозе печени
ВЫВОД:
Дата ________________
ЗАНЯТИЕ № 31
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ АУДИТОРНАЯ РАБОТА
ПО ТЕМЕ «ОБМЕН И ФУНКЦИИ АМИНОКИСЛОТ. ОБМЕН НУКЛЕОТИДОВ»
Задания для самостоятельной работы:
1. 1.Составить метаболическую карту аминокислотного обмена.
2. На карте отметить:
2.1. Источники аминокислот в тканях.
2.2. Пути превращения аминокислот в тканях.
2.3. Регуляторные ферменты гликолиза, метаболизма гликогена, глюконеогенеза, пентозофосфатного пути.
2.4. Витаминзависимые ферменты.
3. Решение и обсуждение ситуационных задач.
Дата: ________________
ЗАНЯТИЕ № 33
РАБОТА № 1. КАЧЕСТВЕННОЕ И КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ БИЛИРУБИНА
(ПО МЕТОДУ ЙЕНДРАШИКА)
ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ. При разрушении эритроцитов (у человека через 100-120 дней) в клетках ретикулоэндотелиальной системы костного мозга, селезенки, печени происходит распад гемоглобина. Конечным продуктом распада гема является непрямой билирубин, который поступает в кровь и транспортируется альбуминами в печень, где происходит его обезвреживание с образованием прямого билирубина.
В сыворотке крови имеется два вида билирубина. Основная форма - это непрямой (свободный) билирубин, который не связан с глюкуроновой кислотой и дает непрямую диазореакцию. В крови содержится незначительное количество прямого (связанного) билирубина - этот билирубин связан с глюкуронатом и дает прямую диазореакцию. Сумма обоих пигментов дает общий билирубин.
Нарушение обмена билирубина сопровождается развитием желтухи. В связи с этим раздельное количественное определение общего, прямого и непрямого билирубина в сыворотке крови имеет значение для дифференциальной диагностики различных типов желтух.
ПРИНЦИП МЕТОДА: диазореактив дает с прямым билирубином розовое окрашивание. Непрямой билирубин переводят в растворимое состояние добавлением к сыворотке кофеинового реактива, после этого общий билирубин определяется диазореакцией. Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации билирубина в пробе.
ХОД РАБОТЫ: взять три пробирки: опыт 1, 2 и контроль.
| ОТМЕРИТЬ | ОПЫТ1 | ОПЫТ2 | КОНТРОЛЬ |
| ПРЯМОЙ БИЛИРУБИН | ОБЩИЙ БИЛИРУБИН | ||
   СЫВОРОТКА КРОВИ
NaCl 0,9%
ДИАЗОРЕАКТИВ КОФЕИНОВЫЙ
РЕАКТИВ
| 0,5 мл 1,75 мл 0,25 мл | 0,5 мл 0,25 мл 1,75 мл | 0,5 мл 0,25 мл 1,75 мл |
Содержимое пробирок перемешать и инкубировать
при температуре 18оС.
ОПЫТ1 - фотометрия через 10 минут
против контроля
ОПЫТ2 - фотометрия через 20 минут
Длина волны: 530-550 нм, кювета 5 мм.
РЕЗУЛЬТАТ:
Опыт1 Е=
Опыт2 Е=
КОНЕЧНЫЙ РЕЗУЛЬТАТ: находят по калибровочному графику. По разнице между количеством общего и прямого билирубина определяют уровень непрямого билирубина.
Прямой билирубин:
С = мкмоль/л
Общий билирубин:
С = мкмоль/л
Непрямой билирубин:
С = мкмоль/л
КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.
Нормальное содержание общего билирубина в сыворотке крови у взрослых 5,0 - 20,5 мкмоль/л; связанного билирубина (прямого) – 1,0 - 7,5 мкмоль/л; свободного билирубина (непрямого) – 1,7 - 17,1 мкмоль/л.
У новорожденных нормальное содержание общего билирубина в сыворотке крови составляет 12 – 20 мкмоль/л, у детей 2-14 лет 8,55 – 20,52 мкмоль/л.
Повышенное содержание общего билирубина в сыворотке крови отмечается при желтухе новорожденных, повреждении гепатоцитов (воспалительном, токсическом), закупорке желчных протоков, гемолитической болезни.
При паренхиматозной желтухе:
- в крови повышается содержание прямого и непрямого билирубина;
- в моче появляется прямой билирубин и уробилиноген.
- уменьшается выделение стеркобилина с калом.
При обтурационной (механической) желтухе:
- в крови повышается содержание прямого билирубина;
- в моче появляется прямой билирубин (темная моча);
- отсутствует выделение стеркобилина (ахолический кал).
При гемолитической желтухе:
- в крови повышается содержание непрямого билирубина;
- в моче повышается содержание стеркобилиногена;
- увеличивается выделение стеркобилина (темный кал).
ВЫВОД:
Дата ______________
ЗАНЯТИЕ № 34
