ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ. Определение глюкозы в цельной крови или плазме производится у каждого пациента для оценки состояния метаболизма углеводов и диагностики патологии (гипергликемий, гипогликемий). Для определения содержания глюкозы в крови используется энзиматический метод, основанный на окислении глюкозы глюкозооксидазой до глюконовой кислоты в присутствии кислорода воздуха. Метод является высокоспецифическим для определения D-глюкозы в присутствии других восстанавливающих веществ, содержащихся в экстрактах тканей и биологических жидкостях.
ПРИНЦИП МЕТОДА. Глюкозооксидаза – сложный фермент, содержащий в качестве простетической группы молекулу ФАД. При окислении глюкозы глюкозооксидазой происходит отщепление двух атомов водорода у первого атома углерода в молекуле глюкозы. Далее эти два атома водорода передаются на ФАД, образуется ФАДН2. Последний передает атомы водорода на молекулярный кислород с образованием Н2О2. Затем Н2О2 расщепляется ферментом пероксидазой на воду и атомарный кислород, который окисляет хромоген (краситель), приобретающий при окислении окраску.
ХИМИЧЕСКИЙ МЕХАНИЗМ МЕТОДА:
 |
ХОД РАБОТЫ: взять три пробирки: опыт, стандарт и контроль.
 ПРОБА
отмерить
| ОПЫТ | СТАНДАРТ | КОНТРОЛЬ |
| Сыворотка крови Стандартный раствор глюкозы (5,55 ммоль/л) Н2О Рабочий реактив | 0,02 мл - - 2,0 мл | - 0,02 мл - 2,0 мл | - - 0,02 мл 2,0 мл |
| Перемешать, инкубация в термостате 20 минут при 37ºС. | |||
| ФЭК, l = 500 нм, колориметрия опыта и стандарта против контрольной пробы, кювета - 5 мм. |
РЕЗУЛЬТАТ: Ест =; Еоп =; Сст = 5,55 ммоль/л
|
 |
|
КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.
Нормальное содержание глюкозы в крови у взрослых составляет 3,3 – 6,4 ммоль/л, у новорожденных 1,7 – 3,3 ммоль/л, у детей 2-14 лет 2,5 –5,5 ммоль/л.
Содержание глюкозы в крови увеличивается (гипергликемия) при некоторых физиологических состояниях (стресс, прием углеводов с пищей), а также при патологиях: сахарный диабет, острый панкреатит, инфаркт миокарда, стенокардия, гиперфункции ряда эндокринных желез (тиреотоксикоз, глюкагонома, синдром Иценко-Кушинга, феохромоцитома).
Содержание глюкозы в крови уменьшается (гипогликемия) при некоторых физиологических состояниях (голодание, недостаток приема с пищей углеводов, тяжелая изнурительная физическая работа), а также при патологии: инсулинома, передозировка инсулина при лечении сахарного диабета, дефицит глюкагона, болезнь Аддисона, гипотиреоз, отравление мышьяком, четыреххлористым углеродом, фосфором, бензолом, нарушение всасывания углеводов, гликогенозы, у детей от больных диабетом матерей.
ВЫВОД:
Дата: ________________
ЗАНЯТИЕ № 20
