Работа № 1. Количественное определение глюкозы в крови. Энзиматический (глюкозооксидазный) метод

ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ. Определение глюкозы в цельной крови или плазме производится у каждого пациента для оценки состояния метаболизма углеводов и диагностики патологии (гипергликемий, гипогликемий). Для определения содержания глюкозы в крови используется энзиматический метод, основанный на окислении глюкозы глюкозооксидазой до глюконовой кислоты в присутствии кислорода воздуха. Метод является высокоспецифическим для определения D-глюкозы в присутствии других восстанавливающих веществ, содержащихся в экстрактах тканей и биологических жидкостях.

ПРИНЦИП МЕТОДА. Глюкозооксидаза – сложный фермент, содержащий в качестве простетической группы молекулу ФАД. При окислении глюкозы глюкозооксидазой происходит отщепление двух атомов водорода у первого атома углерода в молекуле глюкозы. Далее эти два атома водорода передаются на ФАД, образуется ФАДН₂. Последний передает атомы водорода на молекулярный кислород с образованием Н₂О₂. Затем Н₂О₂ расщепляется ферментом пероксидазой на воду и атомарный кислород, который окисляет хромоген (краситель), приобретающий при окислении окраску.

ХИМИЧЕСКИЙ МЕХАНИЗМ МЕТОДА:

 

 

ХОД РАБОТЫ: взять три пробирки: опыт, стандарт и контроль.

 

ПРОБА   отмерить	ОПЫТ	СТАНДАРТ	КОНТРОЛЬ
Сыворотка крови Стандартный раствор глюкозы (5,55 ммоль/л) Н2О Рабочий реактив	0,02 мл   -   - 2,0 мл	-   0,02 мл   - 2,0 мл	-   -   0,02 мл 2,0 мл
Перемешать, инкубация в термостате 20 минут при 37ºС.
ФЭК, l = 500 нм, колориметрия опыта и стандарта против контрольной пробы, кювета - 5 мм.

 

РЕЗУЛЬТАТ: Е_ст =; Е_оп =; С_ст = 5,55 ммоль/л

 

·

Конечный результат получают по формуле:

Ест

 

 

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.

Нормальное содержание глюкозы в крови у взрослых составляет 3,3 – 6,4 ммоль/л, у новорожденных 1,7 – 3,3 ммоль/л, у детей 2-14 лет 2,5 –5,5 ммоль/л.

Содержание глюкозы в крови увеличивается (гипергликемия) при некоторых физиологических состояниях (стресс, прием углеводов с пищей), а также при патологиях: сахарный диабет, острый панкреатит, инфаркт миокарда, стенокардия, гиперфункции ряда эндокринных желез (тиреотоксикоз, глюкагонома, синдром Иценко-Кушинга, феохромоцитома).

Содержание глюкозы в крови уменьшается (гипогликемия) при некоторых физиологических состояниях (голодание, недостаток приема с пищей углеводов, тяжелая изнурительная физическая работа), а также при патологии: инсулинома, передозировка инсулина при лечении сахарного диабета, дефицит глюкагона, болезнь Аддисона, гипотиреоз, отравление мышьяком, четыреххлористым углеродом, фосфором, бензолом, нарушение всасывания углеводов, гликогенозы, у детей от больных диабетом матерей.

ВЫВОД:

Дата: ________________

ЗАНЯТИЕ № 20