Определение гемоглобина по методу Сали производится методом визуальной колориметрии. Принцип метода заключается в том, что гемоглобин крови под влиянием соляной кислоты превращается в солянокислый гематин бурого цвета, интенсивность окраски которого сравнивают со стандартным раствором, находящимся в гемометре Сали.
Оснащение: гемометр Сали, стеклянная палочка, капилляр вместимостью 0,02 мл, 0,1 н. раствор соляной кислоты, дистиллированная вода, глазная пипетка.
Ход работы: гемометр Сали представляет собой штатив с тремя гнездами. В крайние гнезда вставлены запаянные пробирки со стандартным раствором солянокислого гематина с содержанием гемоглобина в нем 166,7г/л (рис. 6а). В среднем гнезде находится градуированная пробирка (рис. 6б). Задняя стенка штатива закрыта матовым стеклом.
В среднюю пробирку гемометра до нижней круговой метки «2» внесите 0,1 N раствор соляной кислоты. Капилляром наберите 0,02 мл крови. Тщательно вытрите кончик капилляра снаружи. Внесите кровь на дно пробирки таким образом, чтобы верхний слой жидкости остался прозрачным. Повторными всасываниями и выдуваниями промойте капилляр верхним слоем жидкости.
Путем осторожного встряхивания содержимое пробирки перемешайте и оставьте стоять в течение 5 минут. Вследствие гемолиза и образования солянокислого гематина смесь становится прозрачной и буреет. Через 5 минут к исследуемой жидкости добавьте дистиллированную воду глазной пипеткой по каплям, каждый раз тщательно перемешивая смесь стеклянной палочкой. Разведение закончите, когда цвет жидкости сравняется с цветом стандартов. Цвет жидкости и стандартов необходимо сравнивать при дневном освещении в проходящем свете, держа гемометр в вытянутой руке на уровне глаз. Определите, какому делению шкалы соответствует нижний мениск жидкости. Цена деления шкалы соответствует 0,2. Концентрацию гемоглобина пересчитайте в граммах на 1 л (г/л), для чего полученные данные умножьте на 10.
Рис. 6. Гемометр Сали и капилляр
Оформление результатов работы: полученные результаты определения содержания гемоглобина занесите в тетрадь протоколов опытов, оцените их и сделайте вывод, сравнив с нормой.
Работа 4.Расчет цветового показателя (ЦП) крови.
Ход работы: определив в крови испытуемого содержание гемоглобина и количество эритроцитов, вычислите цветовой показатель по формуле:
3 х Hb(г/л)
ЦП = --------------------------------------------
Три первые цифры числа
Эритроцитов
Оформление результатов работы: полученные результаты расчета цветового показателя занесите в тетрадь протоколов опытов, оцените их и сделайте вывод, сравнив с нормой.
V. ФИЗИОЛОГИЯ ТРОМБОЦИТОВ. ГЕМОСТАЗ. ГРУППЫ КРОВИ. РЕЗУС-ФАКТОР.
Физиология тромбоцитов.
Тромбоциты – или кровяные пластинки это маленькие плоские клетки разнообразной формы (в основном овальной), не имеющие ядра, диаметром 1-4 мкм (рис.7). Продолжительность их жизни составляет 8-11 дней, после чего они разрушаются в печени, легких и селезенке.
Рис. 7. Тромбоцит (электронная микроскопия)
Тромбоцитопоэз – это процесс образования тромбоцитов в организме. В основном он протекает в костном мозге и включает следующие этапы:
КОЕ-мег (мегакариоцатарная) – промегакариобласт – мегакариобласт – промегакариоцит - зрелый мегакариоцит - тромбоцитарный мегакариоцит – протромбоциты – тромбоциты.
Костный мозг человека содержит около 15х10 6 мегакариоцитов на 1 кг массы тела. В среднем мегакариоцит высвобождает до 3000 тромбоцитов.
В 1 литре крови их содержится 150–350х109/л (200-400х109/л). Из общего количества тромбоцитов в крови находится 70%, в селезенке – 30%.
Продолжительность жизни тромбоцитов 6-10 дней. Клетки разрушаются в костном мозге, селезенке и печени.
Тромбоциты выполняют следующие функции:
1) участие в процессе свертывания крови – за счет тромбоцитарных факторов свертывания крови;
2) ангиотрофическая – проявляется в том, что они оказывают влияние на структуру и функцию сосудов микроциркуляции, питая эндотелиальные клетки капилляров;
3) регуляция тонуса сосудистой стенки за счет серотонина, находящегося в гранулах тромбоцитов, и тромбоксана А2, образующегося из арахидоновой кислоты в процессе агрегации тромбоцитов.
Тромбоциты обладают следующими свойствами:
1) фагоцитоз;
2) амебовидная подвижность;
3) секреторная активность;
4) адгезия (прилипание);
5) агрегация (скучивание).
Адгезия – это способность тромбоцитов прилипать к чужеродной поверхности, в частности к измененной сосудистой стенке. При соприкосновении с чужеродной поверхностью тромбоциты распластываются и выпускают псевдоподии.
Агрегация – склеивание тромбоцитов друг с другом. Сначала развивается обратимая, а затем при появлении активного фермента тромбина агрегация становится необратимой.
В тромбоцитах обнаружено много специфических соединений, участвующих в свертывании крови. Их называют тромбоцитарными (пластиночными) факторами и нумеруют арабскими цифрами. Наиболее важными являются фактор 3 – тромбоцитарный тромбопластин или тромбопластический фактор и фактор 6 – тромбостенин.
Система гемостаза.
Гемостаз – это процесс остановки кровотечения. Однако следует помнить, что в организме существует единая система, которая также поддерживает жидкое состояние крови и растворение тромба после прекращения кровотечения (фибринолиз), восстанавливая проходимость сосуда.
Процесс гемостаза протекает в два этапа:
1. сосудисто-тромбоцитарный (первичный) гемостаз;
2. коагуляционный (вторичный).
Первичный гемостаз
Сосудисто-тромбоцитарный механизм гемостаза обеспечивает остановку кровотечения в мельчайших сосудах (сосудах микроциркуляторного русла), где имеется низкое кровяное давление и малый просвет сосудов. В них остановка кровотечения может произойти за счет:
1. спазма сосудов;
2. образования тромбоцитарной пробки агрегатами тромбоцитов;
3. сочетания того и другого.
В результате адгезии тромбоцитов к соединительно-тканным волокнам в области краев раны мембрана этих клеток становится более проницаемой, и из них выходят АТФ, АДФ и сосудосуживающие вещества (серотонин и катехоламины), а также тромбоцитарный фактов 3.
В результате действия сосудосуживающих веществ, просвет сосудов уменьшается (возникает функциональная ишемия) и перекрывается тромбоцитами, прилипшими к коллагеновым волокнам.
Выделившийся АДФ вызывает дальнейшую агрегацию тромбоцитов, ускоряя тем самым закупорку просвета сосудов. Агрегация тромбоцитов под действием АДФ носит обратимый характер. Тромбоцитарная пробка пропускает через себя плазму крови. Далее наступает необратимая агрегация тромбоцитов, при которой тромбоцитарная пробка становится непроницаемой для крови. Эта реакция возникает под влиянием тромбина, изменяющего структуру тромбоцитов. Далее из тромбоцитов выделяется фактор 6 – тромбостенин, под влиянием которого происходит сокращение (ретракция) тромбоцитарной пробки, образуется тромбоцитарный тромб. Он прочно закрывает просвет микрососуда и кровотечение останавливается.
Вторичный гемостаз.
Первичный гемостаз останавливает кровотечение в сосудах микроциркуляторного русла (где не высокое артериальное давление).
Сосудисто-тромбоцитарные реакции начинают гемостаз и в крупных сосудах, но тромбоцитарные тромбы не выдерживают высокого давления и вымываются.
В таких сосудах остановить кровотечение способен только фибриновый тромб - прочная пробка.
В процесс гемостаза вовлечены 3 компонента:
1. стенка кровеносных сосудов,
2. форменные элементы крови;
3. плазменная ферментная система крови.
