Подсчет производят в готовых окрашенных мазках периферической крови под микроскопом с использованием иммерсионного объектива.
Оснащение: окрашенные мазки периферической крови, микроскоп, иммерсионное масло.
Ход работы: на предметное стекло с готовым мазком крови капните иммерсионное масло. Погрузите иммерсионный объектив микроскопа в каплю масла. Настройте микроскоп. Считать лучше в самом тонком месте мазка – ближе к его краям. Подсчет рекомендуется производить всегда в одном порядке: одну половину клеток считать в верхней, а другую – в нижней частях мазка, не заходя на самый край и середину. Среди многочисленных эритроцитов, найдите лейкоциты и отдифференцируйте их. Из 100 подсчитанных клеток выведите процентное соотношение отдельных видов лейкоцитов.
Оформление результатов работы: полученные результаты подсчета лейкоцитарной формулы занесите в тетрадь протоколов опытов, оцените их и сделайте вывод, сравнив с нормой.
Работа 5. Определение гематокрита.
Гематокрит – доля объема крови, которую занимают форменные элементы. Этот показатель дает представление о процентном соотношении между объемом плазмы и объемом форменных элементов в крови.
В норме гематокрит составляет у женщин 36-42 (36-42%), у мужчин 40-48 (40-48%). Увеличение гематокрита наблюдается при эритроцитозе, уменьшение – при эритропении или микроцитозе (уменьшение размера эритроцитов) на фоне неизменной концентрации эритроцитов.
Оснащение: гематокритная трубка, предварительно гепаринизированная и высушенная; гематокритная микроцентрифуга.
Ход работы: гематокритная трубка представляет собой стеклянный капилляр, имеющий 100 делений.
Готовую гематокритную трубку заполните кровью до метки «100», закройте резиновым колпачком и центрифугируйте. Определите высоту столбика эритроцитов в градуированной трубке.
Оформление результатов работы: полученные результаты определения гематокрита занесите в тетрадь протоколов опытов, оцените их и сделайте вывод, сравнив с нормой.
IV. ГЕМОГЛОБИН. СКОРОСТЬ ОСЕДАНИЯ ЭРИТРОЦИТОВ. ГЕМОЛИЗ.
Гемоглобин (Hb)
Гемоглобин является основной составной частью эритроцитов и относится к числу важнейших дыхательных белков, осуществляющих транспорт О2 и СО2. Также гемоглобин выполняет буферную функцию – способен связывать ионы водорода.
В каждом эритроците содержится около 28 млн молекул гемоглобина. Гемоглобин – сложный белок – относится к группе хромопротеидов (гемопротеидов), состоит из четырех железосодержащих групп гема (4%) и белка глобина (96%).
В норме у мужчин содержание гемоглобина составляет 130-160 (140-160) г/л, у женщин – 120-150 (120-140) г/л.
Гемоглобин синтезируется эритробластами и нормобластами костного мозга. При разрушении эритроцитов гемоглобин после отщепления гема превращается в желчный пигмент билирубин. Последний с желчью поступает в кишечник, где превращается в стеркобилин и уробилин, выводимые с калом и мочой.
Гемоглобин человека имеет несколько физиологических разновидностей:
1. HbР (примитивный) – такой гемоглобин характерен для эмбрионов в первые 7-12 недель внутриутробного развития. В последствии он замещается на HbF;
2. HbF фетальный (faetus – плод) – содержится преимущественно у плодов. К моменту рождения ребенка на его долю приходится 70-90%. Фетальный гемоглобин обладает более высоким сродством к кислороду, чем HbА, что позволяет тканям плода не испытывать гипоксии. Замещается HbА к году жизни.
3. HbА (аdult – взрослый) - он составляет основную часть нормального Hb взрослого человека.
Гемоглобин обладает способностью обратимо присоединять кислород. Каждая молекула гемоглобина содержит 4 атома двухвалентного железа, каждый из которых свободно связывается с 1 молекулой кислорода. Следовательно, одна молекула гемоглобина транспортирует 4 молекулы кислорода.
1г гемоглобина связывает 1,34 мл кислорода. При присоединении О2 валентность железа не меняется, а сам кислород не переходит в ионную форму и переносится в виде молекулярного кислорода к тканям, где легко освобождается в тканевую жидкость.
Соединения гемоглобина.
В норме гемоглобин содержится в виде 3-х физиологических соединений:
1. Оксигемоглобин (HHbO2) – гемоглобин, присоединивший к себе кислород. Артериальная кровь имеет ярко-алый цвет за счет него.
2. Восстановленный или дезоксигемоглобин (HHb) -оксигемоглобин, который отдал кислород. Он находится в венозной крови, которая имеет более темный цвет, чем артериальная.
3. Карбгемоглобин (HHbCO2) -соединение Hb с углекислым газом, который транспортирует СО2 из тканей к легким.
Гемоглобин обладает способностью образовывать и патологические соединения:
1. Карбоксигемоглобин (HbСО) - соединение гемоглобина с угарным газом. Сродство железа гемоглобина к СО превышает его сродство к кислороду, поэтому даже 0,1% СО в воздухе ведет к превращению 80% гемоглобина в карбоксигемоглобин, который не способен присоединять О2, что опасно для жизни. Однако, это обратимый процесс, и при вдыхании чистого кислорода карбоксигемоглобин легко распадается, чем на практике пользуются для лечения отравлений угарным газом.
2. Метгемоглобин (MetHb) (окисленный гемоглобин) – соединение гемоглобина, в котором под влиянием сильных окислителей (перманганат калия, анилин, бертолетова соль) железо гема из 2-х валентного переходит в 3-х валентное. При накоплении в крови больших количеств метгемоглобина транспорт кислорода к тканям нарушается и может наступить смерть. Только переливание крови может оказать действенную помощь.
