Современные электронные счетчики форменных элементов крови позволяют автоматизировать процесс подсчета. Принцип метода заключается в том, что разведенная суспензия клеток крови засасывается через микроотверстие датчика. При прохождении клеток крови резко возрастает омическое сопротивление, что вызывает импульс напряжения, который подсчитывается электронным блоком прибора. Автоанализаторы способны самостоятельно осуществлять взятие крови из пробирки, ее разведение, гемолиз эритроцитов для подсчета уровня лейкоцитов и тромбоцитов и другие операции.
При отсутствии автоанализатора для определения количества эритроцитов и лейкоцитов используют камеру Горяева.
Рис. 3. Счетная камера Горяева
Камера Горяева представляет собой толстое прямоугольное стекло с двумя сетками, выгравированными на его поверхности (рис. 3а,б). Сетки отделены одна от другой поперечной канавкой во избежание затекания жидкости. Двумя глубокими продольными канавками сетки отделены от стеклянных прямоугольных пластинок, к которым притирают шлифованное покровное стекло. Плоскость поверхности этих пластинок находится на 0,1 мм выше плоскости, на которой нанесены сетки.
Сетка Горяева образована системой перпендикулярных линий. Она состоит из 225 больших квадратов (рис.3в). Из них 100 больших квадратов не разлинованы, а 25 больших квадратов разделены каждый на 16 малых со стороной 1/20 мм, площадью 1/400 кв.мм и объемом 1/4000 мкл (куб.мм).
Счетную камеру заполняют обязательно разбавленной кровью, чтобы создать нужную концентрацию клеток, удобную для подсчета. Для разбавления крови используют смесители или меланжеры (рис. 4).
Смеситель представляет собой капилляр с ампулообразным расширением. В ампуле находится стеклянная бусинка для перемешивания разведенной крови. (В меланжере для подсчета эритроцитов бусинка красного цвета, лейкоцитов – прозрачная.) На капиллярах нанесена градуировка – метки 0,5 и 1,0. Третья метка находится над ампулой: для подсчета эритроцитов – 101, лейкоцитов – 11.
Для подсчета эритроцитов в меланжер набирают кровь до метки 0,5 или 1,0 и раствор до метки 101, при этом кровь разбавляется в 200 или в 100 раз. В меланжер для подсчета лейкоцитов набирают кровь до метки 0,5 или 1,0, а раствор до метки 11, при этом кровь разбавляется в 20 или в 10 раз.
В качестве разбавляющего раствора для подсчета эритроцитов применяют 3% раствор хлорида натрия, так как в гипертоническом растворе эритроциты сморщиваются и становятся заметнее. При подсчете лейкоцитов кровь разбавляют 5% раствором уксусной кислоты. Она растворяет оболочки форменных элементов и в поле зрения остаются только ядра лейкоцитов. Уксусную кислоту подкрашивают метиленовым синим, при этом ядра лейкоцитов становятся видны отчетлевее.
Рис. 4. Меланжеры для разбавления крови при подсчете форменных элементов: а) эритроцитов, б) лейкоцитов
Следует отметить, что в лабораториях кровь разбавляют не только в смесителях, но и в пробирках. Для этого в пробирку сначала наливают разбавляющий раствор (для подсчета эритроцитов 4мл, а лейкоцитов – 0,4 мл), а затем добавляют в него 0,02 мл крови. Затем тщательно перемешивают и разведенной кровью (1:200 или 1:20 соответственно) заполняют счетную камеру.
