Лекции.Орг


Поиск:




Категории:

Астрономия
Биология
География
Другие языки
Интернет
Информатика
История
Культура
Литература
Логика
Математика
Медицина
Механика
Охрана труда
Педагогика
Политика
Право
Психология
Религия
Риторика
Социология
Спорт
Строительство
Технология
Транспорт
Физика
Философия
Финансы
Химия
Экология
Экономика
Электроника

 


Основний дослід реакції зв‘язування комплементу (РЗК) з метою серологічної діагностики кашлюку»




Компонети РЗК:

1. Сироватка крові дослідної людини Дослідна система

2. Специфічний антиген

3. Комплемент

4. Еритроцити барана Індикаторна (гемолітична) система

5. Гемолітична сироватка

Принцип РЗК:

Реакція проходить у дві фази. Перша фаза - взаємодія антигену і антитіл за обов'язкової участі комплементу. Друга - виявлення результатів реакції за допомогою індикаторної гемолітичної системи (еритроцити барана і гемолітична сироватка). Руйнування еритроцитів гемолітичною сироваткою відбувається лише у разі приєднання комплементу до гемолітичної системи. Якщо ж комплемент адсорбував раніше на комплексі антиген-антитіло, то гемоліз еритроцитів не настає.

Результат досліду оцінюють, відзначаючи наявність або відсутність гемолізу в усіх пробірках. Реакцію вважають позитивною при повній затримці гемолізу, коли рідина в пробірці безбарвна, і еритроцити осідають на дно, негативною - при повному лізисі еритроцитів, коли рідина інтенсивно забарвлена («лакова» кров). Ступінь затримки гемолізу оцінюють залежно від інтенсивності забарвлення рідини і величини осаду еритроцитів на дні (++++, + + +, + +, +).

Порядок поставлення демонстраційного досліду РЗК:

1. Реакцію проводити в 3 пробірках. Відтитровані інгредієнти (антиген, комплемент, гемолітичну сироватку) розвели фізрозчином таким чином, щоб робоча доза їх містилася в 0,5 мл.

2. Одночасно приготували 3% суспензію овечих еритроцитів. У додатковому ряді пробірок розвели інактивовану прогріванням (560С – 30 хвилин) досліджувану сироватку.

3. При проведенні реакції спочатку змішали досліджувану сироватку, антиген і комплемент.

4. Суміш витримали при температурі 370С впродож 40 хвилин.

5. Після зазначеного терміну в пробірку додали сенсибілізовану гемолітичну систему (2 мл гемолітичної сироватки + 2 мл 3% суспензії еритроцитів).

6. Пробірки знову струснули і помістили у термостат при 370С.

Зробіть облік демонстраційної РЗК з метою серологічної діагностики кашлюку, результати досліду та висновок занесіть до таблиці.

Фази реакції Інгредієнти, що беруть участь у реакції Номера пробірок
1 - дослід 2 – контроль сироватки 3 – контроль антигену
1. 1.Дослідна сироватка, мл 0,5 0,5 -
2.Кашлюковий антиген у робочій дозі, мл 0,5 - 0,5
3.Комплемент у робочій дозі, мл 0,5 0,5 0,5
4.Ізотонічний розчин, мл - 0,5 0,5
Інкубація у термостаті 370С впродовж 30 хвилин
2. 5.Гемолітична система, мл 1,0 1,0 1,0
Інкубація у термостаті 370С впродовж 30 хвилин
Облік результатів:      
Рисунок:        
Висновок __________________________________________________ __________________________________________________ __________________________________________________ ___________________________________________________

 

Пряма реакція імунофлуоресценції, з метою діагностики холери.

Компоненти РІФ:

1. Дослідний матеріал від хворої людини (наприклад, для діагностики холери - випорожнення).

2. Люмінесцентна специфічна сироватка (наприклад, для діагностики холери – холерна люмінесцентна сироватка).

Принцип РІФ:

Імунофлюоресцентний метод є методом вибору для швидкого виявлення та ідентифікації невідомого мікроорганізму в досліджуваному матеріалі.

Аг (з матеріалу) + АТ (з сироватки, міченої флуорохромами) + електроліт = комплекс світиться в УФ-променях.

Для РІФ, часто використовують барвник ізотіоціонат флюоресцеїну – ФІТЦ.

При дослідженні цим методом використовують люмінесцентний мікроскоп.

Постановка РІФ:

· На мазок наносять 30 мкл розчину ФІТЦ мічених антитіл.

· Поміщають скло у вологу камеру і витримують при кімнатній температурі впродовж 20-25 хв. або в термостаті при 37°С впродовж 15 хв.

· Промивають скло у проточній водопровідній воді 2 хв, обполіскують дистильованою водою і висушують на повітрі.

· На висушений мазок наносять краплю рідини вмонтовуючи, мазок накривають покривним склом і мікроскопують з використанням люмінесцентного мікроскопа або люмінесцентної насадки до звичайного оптичного мікроскопу.

Зробіть облік демонстраційної РІФ з метою експрес-діагностики холери, результати досліду та висновок занести до таблиці.

Позитивний результат РІФ Негативний результат РІФ
Рисунок
   
Висновок
_____________________________________ _____________________________________ ______________________________________ ______________________________________




Поделиться с друзьями:


Дата добавления: 2016-07-29; Мы поможем в написании ваших работ!; просмотров: 738 | Нарушение авторских прав


Поиск на сайте:

Лучшие изречения:

Ваше время ограничено, не тратьте его, живя чужой жизнью © Стив Джобс
==> читать все изречения...

2264 - | 2205 -


© 2015-2025 lektsii.org - Контакты - Последнее добавление

Ген: 0.011 с.