Результат реакції:
____________________________________
Титрування бактеріфага за методом Граціо
Титрування фага за Граціо дозволяє провести точне врахування активності препарату, тобто кількість фагових частинок в 1 мл досліджуваної рідини.
Цей метод полягає у такому. До бульйонної культури стафілокока (0,5 мл) додають 1 мл бактеріофага в розведенні 10-4, ретельно перемішують і залишиють на 5 хвилин для адсорбції бактеріофага на бактеріальній клітині. Потім 0,5 мл розплавленого напіврідкого агару (0,7%) додають до суміші двох культур, перемішують і виливають другим шаром у чашку Петрі з 1,5% агаром. Коли агар застигає, чашку ставлять у термостат при температурі 370 С на 7-8 годин.
Далі потрібно підрахувати кількість негативних колоній, кожна з яких виникла в результаті розмноження однієї фагової частки. Для визначення титру бактеріофага за Граціо потрібно отриману кількість негативних колоній помножити на розведення. Наприклад, якщо фаг (в об‘ємі 1 мл) з розведенням 10-4 дав на чашці 7 негативних колоній, то титр фага = 7х10-4 фагових часток в 1 мл нерозведеного субстрату.
Результат досліду занести до протоколу, зробити висновок.
| Рисунок | Результат досліду, висновок |
| ___________________________________________________ ______________________________________________________ _____________________________________________________ ______________________________________________________ _____________________________________________________ _____________________________________________________ ____________________________________________________ ____________________________________________________ ____________________________________________________ |
Фаготипування бактерій:
Фаготипування за Фішером
| Рисунок | Принцип методу | Висновок |
|
| Поставлення цього досліду полягало у такому. Дно чашки Петрі з МПА розкреслювали на квадрати. Проводили посів досліджуваної культури бактерій газоном. Через 5-10 хвилин після посіву на підсушену поверхню живильного середовища у певні квадрати наносили завись стандартних бактеріофагів по 1 краплі | _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ |
Фаготипування за Фюртом
| Рисунок | Принцип методу | Висновок |
|
| 1 мл бактеріофага вносили в 20 мл розплавленого та охолодженого до 450С МПА. Суміш стерильно вилили в чашку Петрі і залишили для застигання. Поділили дно чашки склографом на чотири сектори. У кожний сектор засіяли одну з чотирьох досліджуваних бульйонних культур бактерій. Чашку поставили в термостат при 370С на 18-24 години. Після 24 годин інкубації треба обчислити результат. Відсутність росту бактерій в якомусь із секторів свідчить про співвідношення стандартного бактеріофага дослідної культури і про належність культури до даного фаготипу | _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ |
Метод Отто
| Рисунок | Принцип методу | Висновок |
|
| У чашку Петрі налили 1,5% МПА. Після застигання чашку засіяли густим газоном 16-18-годинної бульйонної культури, гомологічної вихідному фагу, і через 16-18 хвилин посіву на висушену поверхню живильного середовища наносили краплями дослідний фільтрат (фаг). На одній чашці можна поставити декілька проб. Для цього чашку поділили на сектори і в кожний сектор вносили по одній краплі фільтрату. Після того як фаг дифундує в середовище, чашки перевернули вверх дном, підписали, поставили в термостат при температурі 370 С на 18-24 години. Обчислення досліду проводили за: а) повної відсутності росту культури в місці нанесення краплі фільтрату (активний бактеріофаг); б) наявності дрібних стерильних плям-колоній бактеріофага (бактеріофаг слабкої активності) | _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ _________________________ |
