МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь, лейкрциты периферической крови, пунктат лимфатических узлов и костного мозга. Вирус также может быть обнаружен в отделяемом слизистых оболочек генитального тракта, сперме, слюне, слезной жидкости, грудном молоке, спинномозговой жидкости, в трупном материале.
МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:
Вирусологический метод (схема 22.1.1). Выделение вируса из крови и лейкоцитов в связи со сложностью культивирования в клинической практике используется редко. Основным показанием к применению является раннее обнаружение вируса у новорожденных от ВИЧ-инфицированных матерей. Вирус выделяют путем совместного культивирования мононуклеарных лейкоцитов периферической крови пациента с лейкоцитами здоровых доноров в присутствии IL-2 для стимуляции роста Т-лимфоцитов. ЦПД проявляется образованием синцития и лизисом зараженных клеток. Метод позволяет выявить латентную инфекцию. О присутствии вируса судят по результатам определения специфических антигенов ВИЧ (р24, обратной транскриптазы) в культуральной среде и зараженных клетках. Культивирование ВИЧ требует соблюдения специальных условий безопасности при работе.
Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические методы. Иммунохимические исследования. Обнаружение вирусных антигенов (р24) в крови и лимфоцитах с помощью ИФА. Следует учитывать, что р24 в достаточном для выявления количестве присутствует в крови только при первичной инфекции и на поздних стадиях заболевания.
Молекулярно-биологические исследования. Обнаружение РНК вирусов в крови методом RT-ПЦР. Метод основан на преобразовании вирусной РНК в комплементарную ДНК (кДНК) с использованием фермента обратной транскриптазы (RT) и амплификации полученной кДНК методом ПЦР — применяется для определения уровня вирусемии. Чувствительность метода позволяет обнаруживать вирус в малых концентрациях.
Серодиагностика. Обнаружение антител к вирусным антигенам (поверхностным белкам gpl20) — методы ИФА — применяют для массового обследования. В случае положительного результата с целью верификации осуществляют поиск антител к индивидуальным вирусным белкам методом иммуноблоттин-га, непрямой ИФ и другими методами.
Метод иммуноблоттинга ("вестерн-блот") — тестирование сыворотки на наличие антител против отдельных вирусных
антигенов сердцевины и поверхностной оболочки ВИЧ. Вирусные белки с помощью электрофореза в вертикальном блоке полиакриламидного геля разделяют по молекулярной массе и переносят на нитроцеллюлозную мембрану, где антитела сыворотки реагируют с индивидуальными вирусными белками. Образующиеся иммунные комплексы выявляются авторадио-графически или с помощью ИФА.
Для косвенного подтверждения диагноза СПИД могут быть использованы методы оценки иммунного статуса: определение общего количества лимфоцитов, Т-лимфоцитов, соотношения CD4+/CD8+ Т-лимфоцитов, количества натуральных киллеров, уровней сывороточных иммуноглобулинов. Для СПИД характерно развитие Т-клеточного дефицита: снижение количества Т-лимфоцитов, преимущественно Т-хелперов CD4+ (менее 500/мм3), снижение уровня показателя CD4+/CD8+ ниже 1,0; уменьшение количества натуральных киллеров; умеренная поликлональная гипергаммаглобулинемия с увеличением содержания IgG.
