1. Метод газожидкостной хроматографии (ГЖХ). Позволяет разделять сложные смеси органических соединений. Метод используют для обнаружения продуктов жизнедеятельности микроорганизмов в исследуемом материале (летучих жирных кислот, спиртов, нелетучих органических кислот и т.д.). Принцип метода основан на различной скорости движения соединений, растворенных в инертном газе (подвижной фазе), через разогретую колонку, заполненную жидкими смолами (непо-
движная фаза). На выходе колонки имеется детектор, регистрирующий присутствие соединения. Идентификацию веществ производят путем сравнения со стандартами.
2. Методы обнаружения нуклеиновых кислот возбудителя. Нуклеиновые кислоты (НК) возбудителя можно обнаружить в исследуемом материале от больного с помощью методов гибридизации НК (ДНК-зондов) и полимеразной цепной реакции — ПЦР (см. тему 3.2). Эти методы применяют преимущественно для обнаружения плохо- или некультивируемых возбудителей, присутствующих в материале в малых количествах (ВИЧ, вирус гепатита В, М.tuberculosis и др.) в связи с их высокой чувствительностью: метод нуклеиновых "зондов" позволяет обнаруживать НК возбудителя в концентрации Ю-10 г/мл; ПЦР теоретически позволяет обнаружить единичные копии НК. Метод "зондов" является высокоспецифичным. При использовании ПЦР существует высокая вероятность получения ложноположительной реакции, что требует квалифицированной интерпретации полученных результатов. Необходимо также помнить о возможности контаминации материала посторонними НК. ПЦР рационально использовать в качестве экспресс-метода для постановки предварительного диагноза, нуждающегося в обязательном подтверждении с помощью других более достоверных диагностических исследований.
• Серодиагностика и аллергодиагностика
1. Серодиагностика. Метод основан на обнаружении антител в сыворотке крови больного и определении динамики их нарастания в ходе заболевания. Для серодиагностики применяют различные иммунологические реакции (агглютинации, связывания комплемента, непрямой гемагглютинации и др., см. тему 10.2). В качестве стандартных антигенов используют живые культуры микроорганизмов (бактерий, вирусов, грибов) или диагностикумы — убитые взвеси микроорганизмов или экстракты из них, полученные химическим путем.
Серодиагностические исследования часто проводят и для эпидемиологического анализа инфекционной заболеваемости. С этой целью определяют наличие специфических антител у здоровых лиц, что свидетельствует о перенесении ими инфекции или о контакте с соответствующим возбудителем. Кроме того, серологические реакции используют наряду с другими иммунологическими показателями для оценки эффективности вакцинопрофилактики.
При серодиагностических исследованиях необходимо учитывать диагностический титр обнаруженных антител, т.е. такое разведение исследуемой сыворотки, начиная с которого положительная реакция имеет диагностическое значение. Более высокую информативность дают серологические исследования парных сывороток крови больного, взятых в начале болезни и
через разные промежутки времени в ходе ее развития. Диагностическое значение имеет нарастание титра в 4 раза и более в динамике заболевания.
2. Аллергодиагностика. Кожно-аллергические пробы применяют для выявления гиперчувствительности к различного рода антигенам (аллергенам) при диагностике ряда инфекционных заболеваний (туберкулез, бруцеллез, туляремия и др.), а также различных неинфекционных аллергических состояний (атопии и др.).
Кроме того, используют методы аллергодиагностики in vitro, позволяющие оценить состояние специфической сенсибилизации лейкоцитов крови в отношении определенного антигена, например реакция торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ) в присутствии специфического антигена (см. тему 10.4).
