Реакция непрямой гемагглютинации

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) предложена в 1946 г. А. И. Кравченко и М. И. Соколовым, которые в первые установили, что эритроциты человека и других животных обладают способностью адсорбировать на своей поверхности бактериальные полисахариды. Такие адсорбированные антигены вступают в реакцию с сыворотками, содержащими соответствующие данному антигену антитела. Несколько позже Бойден показал, что предварительная обработка эритроцитов некоторыми веществами (например, танином) способствует адсорбции на них белковых молекул. Эритроциты с адсорбированными на них белковыми веществами агглютинируются иммунными сыворотками, содержащими антитела к этим белкам. В последующем Т. Рыцай предложил модификацию метода, предусматривающую сенсибилизацию эритроцитов, обработанных танином, иммунной сывороткой. Такие эритроциты с фиксированными на их поверхности антителами применяются для обнаружения соответствующих антигенов. Следовательно, РНГА может применяться в двух вариантах:

а) для сероидентификации, то есть для определения неизвестного возбудителя болезни или его антигенов при исследовании патологического материала; в этих случаях используют эритроциты, обработанные (сенсибилизированные) специфическими антителами;

б) для серологической диагностики инфекционных заболеваний путем обнаружения в исследуемых сыворотках специфических антител; в данном варианте применяются эритроциты, сенсибилизированные специфическими антигенами бактерий, риккетсий или вирусов.

Оценка результатов РНГА проводится по внешнему виду осадка эритроцитов в пробирках или лунках пластикатовых планшет без их встряхивания. При положительной РНГА образуется характерный кружевной осадок с непрямыми волнистыми краями («перевернутый зонтик»). При отрицательной реакции эритроциты оседают в форме компактного небольшого диска с ровными краями на дне пробирок или лунок (осадок в виде «пуговки»).

РНГА отличается высокой чувствительностью и спецефичностью, и по этим качествам значительно превосходит многие другие серологические реакции. К достоинствам реакции относится и возможность получить результаты в сравнительно короткие сроки – через 2-3 часа.

Реакция Кумбса (антиглобулиновый тест)

Неполные антитела, в отличие от нормальных, моновалентны, поскольку они имеют один активный центр, способный взаимодействовать только с одним эпитопом антигена в то время, как другие эпитопы остаются не связанными.

В результате этого не происходит образование крупных комплексов, выпадающих в осадок в растворе электролита. Последние проявляются только в реакциях с бивалентными антителами. Для исправления этого положения в реакцию вводится антиглобулиновая сыворотка (АГС), содержащая бивалентные антитела к глобулину. Она свяжет между собой моновалентные антитела, содержащиеся в исследуемом материале. Таким образом, произойдет визуально видимая реакция гемагглютинации или агглютинация, свидетельствующая о наличии в исследуемой сыворотке неполных (моновалентных) антител. Например, в случае беременности резус-отрицательной женщины резус-положительным плодом у неё в сыворотке крови появятся неполные антитела. Для их выявления в пробирки с исследуемой сывороткой крови вносят в качестве антигена резус-положительные эритроциты, а затем АГС. Появление гемагглютинации свидетельствует о положительной реакции.

Реакция преципитации

В отличие от реакции агглютинации, где антигенами служат целые клетки, в реакции преципитации применяются растворимые или мелкодисперсные антигены, представляющие собой прозрачную или слегка опалесцирующую жидкость. Так, в качестве антигенов могут быть использованы продукты распада микробной клетки – лизаты, фильтраты, экстракты бактериальных культур. При положительной реакции преципитации образуется помутнение растворов, и выпадает нежный осадок.

Реакция преципитации, таким образом, отличается от агглютинации не только размерами частиц антигена, но и видом образующегося осадка.

Антигены, участвующие в реакции преципитации, называют преципитиногенами, антитела сыворотки – преципитинами, а образующийся специфический комплекс, выпадающий в осадок при положительных реакциях – преципитатом. Преципитиногены отличаются большой устойчивостью к высокой температуре – они выдерживают кипячение, сохраняя способность активно реагировать с антителами. Следует отметить, что комплекс антиген – антитело образуется только при определенных (оптимальных) соотношениях концентрации реагирующих молекул.

Реакция преципитации применяется с целью:

а) сероидентификации – определения видовой принадлежности бактерий;

б) для определения видовой принадлежности продуктов, белковых пятен и т. д. – в судебно – медицинской практике;

в) для серодиагностики инфекционных болезней, то есть для обнаружения специфических антител в исследуемой сыворотке.

Достоинствами метода преципитации являются его простота, а также возможность проводить анализ смешанных антигенов и антител. К недостаткам относится довольно низкая чувствительность и большая длительность исследования.

Существуют различные модификации постановки реакции преципитации.

 

3.2.1. Реакция преципитации с разведённым антигеном

Реакция ставиться в узких преципитационных пробирках. В пробирки разливают равные объемы различных разведений антигена и добавляют одинаковые количества иммунной сыворотки. В пробирках с оптимальным соотношением антигена и соответствующих ему антител наблюдается помутнение смеси или выпадение осадка.