Простым методом исследования микрофлоры воздуха является качественный метод оседания микробов на поверхность агара в чашках Петри. Этот метод не дает полного количественного представления о микрофлоре воздуха. Он почти не улавливает тонкодисперсные бактериальные и пылевые фракции. Однако пользуясь этим методом, можно контролировать чистоту воздуха помещений. В зависимости от предполагаемой загрязненности воздуха микробами чашки со средой экспонируют от 5 до 20 мин. Чем чище воздух, тем продолжительнее экспозиция. Если поставлена цель уловить определенную группу микробов, используют элективную агаровую среду и экспозицию увеличивают на 30 минут.
Чтобы обнаружить микробы, содержащиеся в воздухе данного помещения, производят посев на стерильную чашку Петри со стерильным застывшим МПА. Для этого чашку Петри открывают и ставят в исследуемом помещении в таком месте, в котором нет движения воздуха. Чашку оставляют открытой определенное время, затем закрывают, переворачивают вверх дном и ставят в термостат на 48 ч.
На площади в 100 см² за 5 мин осаждается примерно столько клеток, сколько их находится в 10 л воздуха (0,01 м³). Для расчета микробного числа воздуха используют следующую формулу:
X = 
где Х – количество микробов в 1 м³ воздуха;
а – количество колоний в чашке;
в – площадь чашки (πr²), см²;
t – время экспозиции, мин;
5 – время экспозиции, мин;
10 – объем воздуха, из которого происходит оседание микробов за 5 мин, л;
100 – площадь, на которую происходит оседание, см²;
1000 – объем воздуха, л.
Если в среднем на одной чашке с питательным агаром содержание микробов в 1 м³ менее 1500, то воздух считается чистым, если более 2500 – загрязненным.
КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ
1. По каким показателям судят о росте микроорганизмов в питательных средах?
2. Какие методы определения количества клеток микроорганизмов существуют?
3. На чем основаны косвенные методы определения количества клеток микроорганизмов?
4. От чего зависит выбор метода определения количества клеток микроорганизмов?
5. Чем определяется точность любого метода и от чего зависят технические ошибки метода?
6. Какие методы определения количества клеток микроорганизмов под микроскопом вы знаете, в чем их основные ограничения использования?
7. В чем преимущества и сущность метода Виноградского -
Брида?
8. Какие ограничения имеет метод количественного учета микроорганизмов с помощью счетных камер?
9. Какое устройство имеет счетная камера Горяева и каковы правила работы с ней?
10. В чем состоит сущность метода микрокультур?
11. В каких случаях используют для подсчета клеток микроорганизмов мембранные фильтры, в чем состоят особенности работы с ними?
12. В чем состоит смысл принципа Коха и в основе какого метода определения количества клеток микроорганизмов он лежит?
13. Какие этапы выделяют в чашечном методе Коха?
14. Что такое КОЕ?
15. Основные правила приготовления разведений исходной суспензии.
16. Как проводят посев суспензий и подсчет выросших колоний при высеве на плотные питательные среды?
17. В чем состоит принцип метода определения количества клеток высевом в жидкие среды?
18. Что такое числовая характеристика и правила ее составления?
19. Привести пример расчета числа микроорганизмов в единице объема по таблице Мак - Креди.
20. В каких случаях применяют метод определения биомассы микроорганизмов взвешиванием и какие он имеет ограничения использования?
21. Из каких операций состоит метод определения биомассы взвешиванием?
22. На чем основывается нефелометрический метод определения количества клеток и биомассы микроорганизмов?
23. Микробиология молока и молочных продуктов.
24. Какие методы обычно применяют для определения общего количества микроорганизмов в молоке?
25. В чем сущность косвенного метода определения количества микроорганизмов в молоке?
26. Как правильно приготовить солодовое (пивное) сусло?
27. Как проводят приготовление смывов с поверхности оборудования и предметов для их санитарно-бактериологического контроля?
28. Как определяют микробное число при бактериологическом исследовании смывов?
29. В каком случае санитарное состояние поверхности считается отличным?
30. Микрофлора воздуха.
31. В чем особенности седиментационного метода оценки санитарного состояния воздуха закрытых помещений?
32. Как рассчитать микробное число воздуха и в каком случае воздух в помещении считается чистым?
7 ТЕХНИКА БЕЗОПАСНОСТИ ПРИ ВЫПОЛНЕНИИ
ЛАБОРАТОРНЫХ РАБОТ
1. Каждый студент в микробиологической лаборатории работает на постоянном месте, выполняя задания индивидуально.
2. На рабочем месте не должно быть посторонних предметов. Личные вещи следует хранить в специально отведенном месте.
3. Студент должен работать только в чистом халате, сменной обуви, волосы должны быть подобраны, не падать на плечи.
4. В лаборатории запрещается курение, прием пищи, лишнее хождение по лаборатории.
5. Нельзя оставлять работающие лабораторные установки, а также включенные приборы без присмотра.
6. При работе с культурами микроорганизмов необходимо соблюдать все правила микробиологической техники: на пробирках, колбах, чашках Петри, должна быть сделана надпись, содержащая родовые и видовые названия культуры, дату засева, фамилию студента и номер группы.
7. Поскольку некоторые микроорганизмы, особенно споры грибов, являются аллергенами, не допускать их распыления – не оставлять открытыми чашки Петри, пробирки, колбы с культурами микроорганизмов.
8. Перед тем как набирать ртом с помощью пипетки суспензии микроорганизмов или реактивы, следует убедиться, что пипетка закрыта с тупого конца ватой.
9. Ни в коем случае нельзя дуть на загоревшуюся пробку, так как это только усилит горение, ее нужно быстро ввести в пробирку, где вата сама потухнет.
10. Все предметы, использованные при работе с живыми культурами, должны быть обеззаражены либо обжиганием в пламени горелки (петли, иглы), либо погружением в дезинфицирующий раствор (предметные и покровные стекла, пипетки, шпатели).
11. Все засеянные пробирки, чашки помещаются в термостат или сдаются лаборанту; отработанный материал (пробирки, чашки Петри) также помещается в определенные емкости по указанию лаборанта для их дальнейшего обеззараживания.
12. В конце занятия студент должен привести в порядок рабочее место, тщательно вымыть руки; необходимо иметь индивидуальное полотенце, салфетки для вытирания рук.
13. Перед уходом из лаборатории дежурный должен проверить, выключены ли газ, вода, электроприборы.
ЛИТЕРАТУРА
1. Асонов, Н.Р. Практикум по микробиологии / Н.Р. Асонов. – М.: Агропромиздат, 1988. – 155 с.
2. Борисов, Л.Б. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии / Л.Б. Борисов [и др.]. – М.: Медицина, 1984. – 256 с.
3. Градова, Н.Б. Лабораторный практикум по общей микробиологии / Н.Б. Градова [и др.]. – М.: ДеЛи принт, 2001. – 131 с.
4. Лерина, И.В. Лабораторные работы по микробиологии / И.В. Лерина, А.И. Педенко. – М.: Экономика, 1986. – 158 с.
5. Нетрусов, А.И. Практикум по микробиологии / А.И. Нетрусов [и др.]. – М.: Академия, 2005. – 608 с.
6. Теппер, Е.З. Практикум по микробиологии / Е.З. Теппер, В.К. Шильникова, Г.И. Переверзева. – М.: Дрофа, 2004. – 256 с.
7. Трушина, Т.П. Микробиология, гигиена и санитария в торговле / Т.П. Трушина. – Ростов н/Д: Феникс, 2000. – 320 с.
СОДЕРЖАНИЕ
| ВВЕДЕНИЕ_____________________________________________ | |
| 1 ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЛИЧЕСТВА КЛЕТОК МИКРООРГАНИЗМОВ ПОД МИКРОСКОПОМ______________ | |
| 1.1 Подсчет клеток на фиксированных окрашенных мазках (метод Виноградского – Брида)_____________________________ | |
| 1.2 Подсчет клеток в счетных камерах______________________ | |
| 1.3 Подсчет клеток на мембранных фильтрах________________ | |
| 1.4 Метод микрокультур_________________________________ | |
| 2 ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЧИСЛА КЛЕТОК МИКРООРГАНИЗМОВ ВЫСЕВОМ НА ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ____________________ | |
| 2.1 Определение количества клеток высевом на плотные питательные среды (метод Коха)____________________________ | |
| 2.2 Определение количества клеток высевом в жидкие среды (метод предельных разведений)_____________________________ | |
| 3 ОПРЕДЕЛЕНИЕ БИОМАССЫ ВЗВЕШИВАНИЕМ__________ | |
| 3.1 Доведение массы центрифужных пробирок или фильтров до постоянного значения__________________________________ | |
| 3.2 Отделение микроорганизмов от среды___________________ | |
| 3.3 Определение биомассы_______________________________ | |
| 4 ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОЛИЧЕСТВА КЛЕТОК И БИОМАССЫ НЕФЕЛОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ______________________ | |
| 5 ПРАКТИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ________________________________ | |
| 5.1 Лабораторная работа № 1. Методы определения общего количества микроорганизмов в сыром молоке (6 часов)________ | |
| 5.2 Лабораторная работа № 2. Методы количественного учета дрожжей (6 часов)________________________________________ | |
| 5.3 Лабораторная работа № 3. Определение количества микроорганизмов в смыве с поверхности предметов. Санитарно-микробиологический контроль воздуха (6 часов)____ | |
| 6 КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ_____________________________ | |
| 7 ТЕХНИКА БЕЗОПАСНОСТИ ПРИ ВЫПОЛНЕНИИ ЛАБОРАТОРНЫХ РАБОТ_________________________________ | |
| ЛИТЕРАТУРА___________________________________________ |
Каменская Елена Петровна
Аверьянова Елена Витальевна
КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ УЧЕТ МИКРООРГАНИЗМОВ
Методические рекомендации к лабораторным работам
по курсам «Основы микробиологии», «Микробиология»,
«Общая биология и микробиология» для студентов
специальностей 240901 «Биотехнология» и 260204 «Технология бродильных производств и виноделие» всех форм обучения
Редактор Идт Л.И.
Подписано в печать 17.03.2007. Формат 60´84 1/16
Усл. п. л. - 2,09. Уч.-изд. л. - 2,25
Печать - ризография, множительно-копировальный
аппарат «RISO TR-1510»
Тираж 50 экз. Заказ 2007-11
Издательство Алтайского государственного
технического университета
656038, г. Барнаул, пр. Ленина, 46
Оригинал-макет подготовлен ИИО БТИ АлтГТУ
Отпечатано в ИИО БТИ АлтГТУ
659305, г. Бийск, ул. Трофимова, 29
