Плотность клеток S. сerevisiae в жидкой среде определяют нефелометрически (ФЭК), используя кювету с длиной оптического пути
0,5 см и зеленый светофильтр (λ= 540 нм). Результаты измерений оптической плотности каждой суспензии (контролем служит вода) записывают в таблицу 4. На основании данных таблицы 4 строят калибровочную кривую, откладывая на оси абсцисс количество клеток дрожжей, а на оси ординат оптическую плотность соответствующей суспензии. Калибровочную кривую строят для быстрого определения количества клеток определенного вида микроорганизмов по показаниям ФЭК.
Таблица 4 – Количество клеток дрожжей в суспензиях, установленное с помощью камеры Горяева, и соответствующие показания ФЭК
| Разведе-ние | Количество клеток микроорганизмов в большом квадрате счетной камеры | Среднее число клеток в малом квадрате а | Количество клеток М, млн/мл | Показа-ния ФЭК | ||||
5.2.4 Определение количества клеток дрожжей высевом
в жидкие среды
Работу проводят согласно методики, описанной в п. 2.2. В качестве питательной среды для выращивания дрожжей используют солодовое (пивное) сусло. В каждую пробирку со средой вносят по 1 мл суспензии дрожжей различных разведений, закрывают ватными пробками и помещают в термостат при температуре 30 ºС на трое суток.
После инкубации регистрируют рост микроорганизмов и определяют вероятное количество клеток дрожжей в единице объема исходной суспензии (см. таблицу 1). Результаты оформляют в таблицу.
5.2.4.1 Приготовление солодового сусла
Зерна ячменя замачивают в холодной воде и проращивают при температуре 35 ºС. После того как ростки станут вдвое длиннее зерен, последние высушивают до воздушно-сухого состояния (можно при слабом подогреве), получая солод. Для приготовления сусла солод крупно размалывают и смешивают с водой (250 г солода на 1 л воды). Затем нагревают до температуры 50 ºС и поддерживают эту температуру в течение 30 мин, непрерывно помешивая смесь, чтобы избежать образования комков. Далее, для лучшего выделения фермента амилазы температуру поднимают до 57 ºС и поддерживают ее на этом уровне до исчезновения реакции на крахмал (синего окрашивания с йодом). Пробы на осахаривание крахмала проводят в фарфоровой чашке в капле жидкости. При указанном режиме происходит также гидролиз белков до аминокислот и пептидов.
Полученное сусло отфильтровывают через вату или бумажный фильтр. Такое сусло содержит от 10 до 20 % сахара. Точное его содержание определяют по плотности раствора при помощи сахариметра. Сусло разбавляют водой до концентрации сахара 6…8 % и стерилизуют 30 мин при температуре 115 ºС и давлении 0,5 атм.
5.3 Лабораторная работа № 3. Определение количества
микроорганизмов в смыве с поверхности предметов.
Санитарно-микробиологический контроль воздуха (6 часов)
Цель работы:
1. Освоить методы санитарно-бактериологического контроля технического оборудования и инвентаря микробиологической лаборатории.
2. Изучить седиментационный метод оценки санитарного состояния воздуха закрытых помещений.
Задания:
1. Приготовить смывы с поверхности посуды, оборудования и столов, пользуясь специальными трафаретами.
2. Сделать посевы на МПА для определения общего количества микроорганизмов.
3. Приготовить мазки из смывов, зафиксировать термическим методом и окрасить по Грамму. Промикроскопировать, зарисовать и сделать заключение.
4. Определить содержание микроорганизмов в воздухе лабораторных помещений методом седиментации.
5. Заполнить протокол бактериологического исследования и сделать общее заключение по результатам исследований.
Оборудование и материалы:
– стерильные чашки Петри;
– МПА в колбах;
– пробирки;
– стерильные марлевые салфетки;
– пипетки градуированные на 1 мл;
– спиртовки;
– трафареты металлические;
– предметные стекла;
– бактериологические петли;
– пинцеты;
– микроскопы биологические;
– стерильная водопроводная вода;
– наборы реактивов для окраски по Грамму.
