Посев и регистрация результатов

Стерильную среду предварительно разливают в пробирки (колбы)

и стерилизуют. В пробирки (колбы) следует наливать одинаковый объем среды. Посев проводят из каждого разведения или из 4…5 последних, причем каждое разведение высевают в 3…5 повторностях (параллельных пробирках). Количество посевного материала везде одинаково и, как правило, составляет 1 мл. Засеянные пробирки помещают в термостат. Время инкубации колеблется от 2 до 15 суток и зависит от скорости роста микроорганизмов, численность которых определяют. После инкубации регистрируют рост микроорганизмов, используя различные показатели: помутнение среды, образование пленки, осадка, газа или накопление в среде определенных продуктов метаболизма.

Наиболее вероятное число микроорганизмов в единице объема рассчитывают по таблице Мак – Креди (таблица 1), разработанной на основании методов вариационной статистики.

Таблица 1 – Наиболее вероятное количество клеток микроорганизмов в единице объема исходной суспензии (по Мак – Креди)

Число-вая характе- ристика	Наиболее вероятное число микроорганизмов при засеве параллельных пробирок	Чис-ловая характе- ристика	Наиболее вероятное число микроорганизмов при засеве параллельных пробирок


	0,0	0,0	0,0	0,0	―	1,6	1,1	0,8
	0,5	0,3	0,2	0,2	―	―	1,4	1,0
	―	―	0,5	0,4	―	―	1,6	―
	―	―	0,7	―	―	―	1,4	1,1
	0,5	0,3	0,2	0,2	―	―	1,7	―
	0,9	0,6	0,5	0,4	2,5	0,9	0,6	0,5
	―	―	0,7	0,6	5,0	1,4	0,9	0,7
	―	―	0,9	―	―	2,0	1,2	0,9
	0,9	0,6	0,5	0,4	―	―	1,6	1,2
	―	―	0,7	0,6	6,0	1,5	0,9	0,7
	―	―	0,9	―	13,00	2,0	1,3	0,9
	―	―	0,7	0,6	20,0	3,0	1,6	1,2
	―	―	0,9	―	―	―	2,0	―
	―	―	0,9	―	25,0	2,0	1,3	0,9
	―	―	1,2	―	70,0	3,0	1,6	1,2
	0,6	0,4	0,3	0,2	110,0	3,5	2,0	1,4
	1,2	0,7	0,5	0,4	―	4,0	―	―
	―	1,1	0,8	0,6	―	3,0	1,7	1,2
	―	―	1,0	0,8	―	3,5	2,0	1,4
	1,3	0,7	0,5	0,4	―	4,0	―	―
	2,0	1,1	0,8	0,6	―	―	2,0	1,4

Продолжение таблицы 1


―	―	1,1	0,8	―	―	3,0	―
―	―	1,3	―	―	2,5	1,1	0,8
2,0	1,1	0,8	0,6	―	4,0	1,6	1,1
3,0	1,5	1,1	0,8	―	6,5	2,0	1,4
―	―	1,3	1,1	―	―	2,5	―
―	―	1,6	―	―	4,5	1,6	1,1
―	7,5	2,0	1,4	―	―	11,5	2,5
―	11,5	3,0	1,7	―	―	16,5	3,0
―	16,0	3,5	2,0	―	―	20,0	4,0
―	9,5	2,0	1,4	―	―	30,0	―
―	15,0	3,0	1,7	―	―	35,0	―
―	20,0	3,5	2,0	―	―	25,0	3,5
―	30,0	―	―	―	―	40,0	4,0
―	25,0	3,0	1,7	―	―	70,0	―
―	45,0	3,5	2,0	―	―	140,0	―
―	110,0	4,0	―	―	―	160,0	―
―	140,0	5,0	―	―	―	―	4,0
―	―	3,5	2,0	―	―	―	5,0
―	―	4,5	2,5	―	―	―	2,5
―	―	―	2,5	―	―	―	3,0
―	―	2,5	1,3	―	―	―	4,0
―	―	3,5	1,7	―	―	―	6,0
―	―	5,0	2,0	―	―	―	7,5
―	―	7,0	2,5	―	―	―	3,5
―	―	3,5	1,7	―	―	―	4,5
―	―	5,5	2,0	―	―	―	6,0
―	―	8,0	2,5	―	―	―	8,5
―	―	11,0	―	―	―	―	5,0
―	―	14,0	―	―	―	―	7,0
―	―	6,0	2,0	―	―	―	9,5
―	―	9,5	2,5	―	―	―	12,0
―	―	13,0	3,0	―	―	―	15,0

Продолжение таблицы 1


―	―	17,0	―		―	―	―	17,5
―	―	20,0	―		―	―	―	8,0
―	―	11,0			―	―	―	35,0
―	―	14,0			―	―	―	45,0
―	―	17,5			―	―	―	25,0
―	―	20,0			―	―	―	35,0
―	―	25,0			―	―	―	60,0
―	―	13,0			―	―	―	90,0
―	―	17,0			―	―	―	100,0
―	―	25,0			―	―	―	180,0
―	―	30,0		―	―	―	―	―

Для этого первоначально составляют числовую характеристику, которая включает три цифры. Первая цифра слева показывает число пробирок в том последнем разведении, при высеве из которого во всех засеянных пробирках был отмечен рост. Две следующие цифры обозначают число пробирок, в которых отмечен рост микроорганизмов при высеве из двух последующих разведений. Затем по таблице 1 находят наиболее вероятное число микроорганизмов, соответствующее данному значению числовой характеристики. Количество микроорганизмов в 1 мл (1 г) исходного субстрата соответствует этому числу, умноженному на то разведение, которое было взято для получения первой цифры числовой характеристики.

Примеры расчета

Пример 1

Разведения исходной суспензии		10^-1	10^-2	10^-3	10^-4
Число засеянных пробирок
Число пробирок, в которых обнаружен рост
Числовая характеристика		―	―	―	―
Наиболее вероятное число клеток микроорганизмов	16,5	―	―	―	―
Количество клеток микроорганизмов в 1 мл исходной суспензии		―	―	―	―