Дослі 12.1 Реакція на тіамін (вітамін В1). Реакція з діазореактивом.
Принцип методу. Метод заснований на здатності вітаміну В1 у лужному середовищі з діазореактивом (суміш солянокислого або сірчанокислого розчину сульфенілової кислоти з розчином нітрату натрію) утворювати складну комплексну сполуку оранжевого або червоного кольору.
Матеріали та реактиви. Розчин сульфанілової кислоти (1%), 5% розчин нітриту натрію, 10%розчин карбонату натрію, тіамін (порошок або його 5% розчин).
Обладнання. Штатив із пробірками, піпетки, шпатель.
Хід роботи.
В пробірку вливають 1 мл розчину сульфанілової кислоти та 1 мл розчину нітриту натрія (утворюється діазореактив). Потім у пробірку вносять невелику кількість (на кінчику шпателя) порошка або 0.5 мл розчину тіаміну й по стінці пробірки оборежно додають 1 мл розчину Nа2СОз. На межі двох рідин з'являється кільце оранжевого або червоного кольору.
Дослідження 12.2 Реакція відновлення рибофлавіну (вітамін В2).
Принцип методу. Під час змішування металічного цинку з концентрованою соляною кислотою утворюється водень, який відновлює жовтий рибофлавін спочатку на родофлавін (проміжне сполучення) червоного кольору, а потім на безбарвний лейкофлавін:
Матеріали та реактиви. Концентрована соляна кислота, металічний цинк, 0,025% розчин вітаміну В2 (суспензія рибофлавіну у воді).
Обладнання. Штатив із пробірками, піпетка.
Хід роботи.
В пробірку вливають 1 мл розчину вітаміну В2, 0.5 мл концентрованої
соляної кислоти й кидають грудочку металічного цинку. Водень, що
виділяється, реагує з рибофлавіном, відновлюючи його. Рідина в пробірці поступово забарвлюється в рожевий колір, а потім знебарвлюється. Під час збовтування знебарвлений розчин лейкофлавіну знову окислюється киснем повітря на рибофлавін
Дослід 12.3 Реакція на піридоксин (вітамін Вб). Реакція з хлоридом
заліза.
Принцип методу. Під час взаємодії піридоксину з розчином хлориду заліза рідина забарвлюється в червоний колір завдяки утворенню комплексної солі типу феноляту заліза.
Матеріали та реактиви. Водний розчин (1%) вітаміну Вб, 1% розчин FеСІз.
Обладнання. Штатив із пробірками, піпетки.
Хід роботи.
У пробірці перемішують 1 мл водного розчину піридоксину та дві краплі розчину хлоріду заліза. Рідина забарвлюється в червоний колір.
Дослід 12.4 Якісні реакції на рутин (вітамін Р).
Принцип методу. Хлорид заліза (3) утворює з рутином комплексні сполуки, забарвлені в смарагдово-зелений колір. Концентрована сірчана кислота утворює з флавонами та флавонолами флавілієві солі, розчини яких мають яскраво -жовте забарвлення.
Під час кислотного гідролізу рутину відщеплюється молекула рутинози. Потім рутиноза розкладається на глюкозу та рамнозу, які мають відновні властивості.
Матеріали та реактиви. Рутин (порошок і насичений водний розчин), 1% розчин хлориду заліза (3), концентрована сірчана кислота, 0.5% розчин соляної кислоти, 10% розчин гідроксиду натрію, реактив Фелінга (реакції на моносахариди):
Обладнання. Штатив із пробірками, піпетки.
Хід роботи.
А. Реакція рутину з хлоридом заліза (3). До 2 мл насиченого водного
розчину рутину додають кілька крапель розчину FеСІз, спостерігають
появу зеленого забарвлення.
Б. Реакція рутину з концентрованою сірчаною кислотою. До 2 мл
насиченого водного розчину рутину обережно по стінці пробірки
доливають 1 мл концентрованої сірчаної кислоти. На межі розділення
двох рідин виникає кільце жовтого кольору.
В. Реакція рутину з реактивом Фелінга. До 0.5 г рутину доливають 5 мл
розчину соляної кислоти, кип'ятять протягом 1 хвилини, потім
фільтрують. До 5 мл фільтрату додають 3 мл розчину гідроксиду натрію
та 3 мл свіжовиготовленого реактиву Фелінга й знову нагрівають до
кипіння. Спостерігають утворення осаду геміоксиду міді червоного
кольору.
Дослід 12.5 Якісна реакція на вітамін С.
Принцип методу. Аскорбінова кислота може легко вступати в окисно - відновні реакції й відновлювати гексоціано -(3) - ферат калію або АgNOз. АgNО звідновлюється до металічного срібла. Кз[Fe(СN)6] відновлюється на К4[Fe(СN)б] який із іонами валентного заліза утворює сіль Fе4[Fe(СN)6]3 синього або зеленого кольору.
Матеріали та реактиви. 0.1% розчин аскорбінової кислоти, 1% розчин Кз[Fe(СN)6]; 1% FеСІз.
Хід роботи.
1. До 1 мл розчину аскорбінової кислоти додають 1 мл Кз[Fe(СN)б] і 0.5 мл розчину FеСІ3. Спостерігають утворення синьо - зеленого забарвлення.
2. До 1 мл розчину вітаміна С додають 1-2 краплі АgNО3. Cпостерігають випадіння чорного осаду.
Дослід 12.6 Якісна реакція на вітамін А з сірчаною кислотою.
Принцип методу. Вітамін А з концентрованою сірчаною кислотою в бензольному розчині утворює комплекс синього кольору.
Матеріали та реактиви 0.05% масляний розчин вітаміну А в хлороформі або розчин риб'ячого жиру в хлороформі в співвідношенні 1:5; концентрована сірчана кислота.
Хід роботи.
Реакція Друммонда.
В пробірку до двох-трьох крапель розчину вітаміну А додають дві-три краплі концентрованої сірчаної кислоти. Вміст пробірки забарвлюється в синій колір, який через деякий час змінюється на фіолетовий і бурий.
Дослід 12.7 Якісні реакції на вітамін Є.
Принцип методу. Взаємодія α-токоферолу з концентрованою азотною кислотою зумовлює забарвлення реакційної суміші в червоний колір. Це спричинено тим, що продукт окислення а-токоферолу має хіноїдну структуру. Під час взаємодії з хлорним залізом (3) α - токоферол окислюється до α -токоферилхінону - сполука червоного кольору.
Матеріали та реактиви. Спиртовий розчин (0.1 %) α -токоферолу, концентрована азотна кислота,1% розчин хлорного заліза (3).
Обладнання. Штатив із пробірками, крапельниця, піпетки.
Хід роботи.
1. Реакція з азотною кислотою.
В суху пробірку вносять пять краплин розчину вітаміну Є, додають 1 мл
концентрованої НNОз. Інтенсивно перемішують і спостерігають
поступову появу червоного забарвлення.
2. Реакція з хлорним залізом.
У суху пробірку вносять 0.5 мл спиртового розчину а-токоферолу, потім
0.5 мл рочину FеСІ3 й інтенсивно перемішують. Спостерігають появу
червоного забарвлення.
Дослід 12.8 Якісна реакція на вітамін К.
Принцип методу. За наявності аніліну спиртовий розчин вітаміну К забарвлюється в
червоний колір, що зумовлено утворенням І-метил-2-
феніламінонафтохінону.
Хід роботи.
В пробірку з 1 мл спиртового розчину вікасолу додають дві краплини аніліну. Після перемішування вміст пробірки забарвлюється в червоний колір.
Питання і вправи до екперимептальної частини
1. Запропонуйте якісні реакції, за допомогою яких можна визначити тіамін?
2. Як довести наявність вітаміну В2 у овочах?
3. Які якісні реакції ви можете запропонувати для виявлення вітаміну РР?
4. В чому поягає суть якісного визначення вітаміну В6?
5. Запропонуйте якісні реакції на вітамін В12?
6. Як проводять вилучення фолієвої кислоти з дріжджів?
7. В чому полягає суть якісної реакції на рутин?
8. Запропонуйте найбільш ефективний, на ваш погляд, метод якісного визначення вітаміну Д. Свій вибір обгрунтуйте.
ЛАБОРАТОРНА РОБОТА № 14
