Ћекции.ќрг


ѕоиск:




 атегории:

јстрономи€
Ѕиологи€
√еографи€
ƒругие €зыки
»нтернет
»нформатика
»стори€
 ультура
Ћитература
Ћогика
ћатематика
ћедицина
ћеханика
ќхрана труда
ѕедагогика
ѕолитика
ѕраво
ѕсихологи€
–елиги€
–иторика
—оциологи€
—порт
—троительство
“ехнологи€
“ранспорт
‘изика
‘илософи€
‘инансы
’ими€
Ёкологи€
Ёкономика
Ёлектроника

 

 

 

 


ћикробиологическое исследование. ÷ель исследовани€: выделение и идентификаци€ Ёѕ ѕ.




÷ель исследовани€: выделение и идентификаци€ Ёѕ ѕ.

ћатериал дл€ исследовани€

1. »спражнени€.

2. –вотные массы.

ѕри необходимости исследует отдел€емое из носа и зева, гной из уха, кровь, мочу, кусочки органов трупа.

ѕри возникновении очага заболеваний коли-энтеритом исследуют (по эпидемиологическим показани€м) пищевые продукты, смывы с рук обслуживающего персонала, игрушек и других предметов.

—пособы сбора материала


—пособы сбора материала

ѕримечание. „ем раньше от начала заболевани€ исследуют испражнени€, тем веро€тнее возможность выделени€ возбудител€.

ќсновной метод исследовани€

Ѕактериологический

’од исследовани€

ѕервый день исследовани€


ѕервый день исследовани€

¬торой день исследовани€

¬ынимают из термостата засе€нные накануне чашки и просматривают их в падающем или проход€щем свете. ѕри наличии малиново-красных колоний на среде Ёндо (с металлическим блеском или без него) или фиолетовых на среде Ёћ— став€т пробную реакцию агглютинации на стекле дл€ дифференциации Ёѕ ѕ от других разновидностей эшерихий.

ƒл€ постановки пробной реакции агглютинации отбирают не менее 10 изолированных колоний, отмеча€ или нумеру€ их на обратной стороне чашки; часть каждой намеченной колонии снимают петлей и агглютинируют в капле поливалентной сыворотки или иммуноглобулина. »спытывают только часть колонии, чтобы в случае положительной реакции агглютинации можно было из оставшейс€ части колонии выделить чистую культуру.

“иповые или поливалентные эшерихиозные сыворотки (или иммуноглобулины) изготовл€ют в производственных услови€х. ѕоливалентные эшерихиозные ќ -сыворотки (или ќ -иммуноглобулины) содержат антитела к нескольким ќ- и  -антигенам эшерихий. — их помощью ориентировочно определ€ют принадлежность выделенной культуры к Ёѕ ѕ. Ќапример, поливалентна€ сыворотка ќ26, ќ55, ќ111 позвол€ет вы€вить одноименные культуры эшерихий. —ыворотки развод€т согласно указанию на этикетке.

¬ лаборатории можно приготовить смесь отдельных ќ -сывороток, соедин€€ не более 5 сывороток, чтобы разведение каждой было не выше 1:10.

ѕостановка пробной реакции агглютинации. Ќа одно или два хорошо обезжиренных предметных стекла нанос€т 10 капель поливалентной сыворотки (или иммуноглобулина). ¬ каждую каплю внос€т часть намеченной колонии и растирают ее.  олонии, давшие реакцию агглютинации, отсевают в пробирки со скошенным агаром и став€т в термостат на 18-20 ч. ≈сли ни одна из 10 колоний не дала реакции агглютинации, дают отрицательный ответ.

“ретий день исследовани€

¬ынимают из термостата посевы и просматривают их. Ќа ћѕј энтеропатогенные кишечные палочки образуют обычно влажный, блест€щий, сероватый налет, реже он бывает мутным. ¬ыросшую на скошенном агаре культуру провер€ют повторно в реакции агглютинации на стекле с поливалентными эшерихиозными сыворотками (или иммуноглобулинами). ≈сли выделенна€ культура дает реакцию агглютинации с поливалентной сывороткой (иммуноглобулином), то ее агглютинируют с каждой типовой сывороткой (иммуноглобулином) раздельно в разведении 1:5 - 1:10. јгглютинаци€ с живой культурой имеет ориентировочное значение.

ƒалее необходимо подтвердить принадлежность выделенной культуры к роду Ёшерихи€ биологическими тестами. ƒл€ этого производ€т посев культуры на полужидкие среды √исса с лактозой, глюкозой, маннитом, сахарозой, мальтозой и другими сахарами, а также на бульон или пептонную воду дл€ определени€ образовани€ индола и сероводорода. ƒл€ этого в пробирки под пробку опускают две индикаторные бумажки, смоченные реактивами, вы€вл€ющими образование этих веществ. ќдна бумажка при наличии индола краснеет, друга€ при наличии сероводорода чернеет.

ѕри ферментации —ахаров реакци€ среды становитс€ кислой и цвет индикатора измен€етс€. ≈сли, помимо кислоты, образуетс€ газ, в среде по€вл€ютс€ пузырьки. ќдновременно определ€ют подвижность бактерий: делают посев в полужидкий (0,2%) агар уколом. ѕодвижные бактерии дают помутнение всей среды, неподвижные - растут только по уколу.

ƒл€ окончательной идентификации выделенной культуры став€т развернутую реакцию агглютинации с живой и гретой культурами: с живой - дл€ определени€  -антигена, с гретой - дл€ определени€ ќ-антигена. ƒл€ постановки развернутой реакции агглютинации антиген готов€т следующим образом: 3-5 мл изотонического раствора натри€ хлорида смывают культуру со скошенного агара. ѕолученную суспензию разливают в две пробирки. ќдну из них прогревают на вод€ной бане при 100∞ — в течение часа.

–азвернутую реакцию агглютинации став€т в двух р€дах пробирок. —ыворотку в обоих р€дах развод€т в соотношении 1:50 - 1:100 (в 1-й пробирке) до титра, указанного на этикетке ампулы с сывороткой. ¬ первый р€д добавл€ют по 2 капли живой культуры, во второй - по 2 капли гретой культуры.

ѕробирки встр€хивают и помещают в термостат на 18-24 ч.

„етвертый день исследовани€

ѕроизвод€т учет изменений сред √исса, регистрируют образование индола и сероводорода.

Ѕольшинство представителей эшерихий ферментирует углеводы с образованием кислоты и газа, расщепл€ет белковый питательный субстрат до образовани€ индола.

”чет пробирочной реакции агглютинации провод€т при помощи лупы или агглютиноскопа. јгглютинаци€ с живой культурой крупнохлопчата€, с убитой - мелкозерниста€. –еакцию считают положительной, если агглютинаци€ с гретой культурой отмечаетс€ в разведении сыворотки не ниже половины титра сыворотки, а жива€ культура агглютинируетс€ сывороткой, разведенной не менее чем 1:200. »грает роль и соотношение антител к гретой и живой культуре. –азведение сыворотки, в котором отмечаетс€ агглютинаци€ с гретой культурой, должно превышать разведение сыворотки, в котором агглютинируетс€ жива€ культура, не менее чем в 2 раза. ¬ табл. 31 приведены различные варианты результата реакции агглютинации.


“аблица 31. –езультаты реакции агглютинации с культурами эшерихий

ѕримечание. ¬озможны три варианта реакции: 1) грета€ культура агглютинируетс€ сывороткой в больших разведени€х, чем жива€, реакци€ - положительна€; 2) жива€ и грета€ культура дают агглютинацию в одинаковых разведени€х сыворотки. “акой результат может свидетельствовать об отсутствии в культуре  -антигена; агглютинаци€ живой и гретой культур вызвана ќ-антигеном. ¬ этих случа€х необходима повторна€ постановка реакции агглютинации; 3) агглютинаци€ живой культуры при отсутствии агглютинации гретой позвол€ет дать отрицательный ответ. ќчевидно, в культуре нет ќ-антигена, соответствующего O-антителам в сыворотке (рис. 41).


–ис. 41. —хема выделени€ и идентификации энтеропатогенных кишечных палочек

 онтрольные вопросы

1.  акой материал исследуют дл€ выделени€ эшерихий?

2. — помощью каких сывороток можно дифференцировать Ёѕ ѕ?

3. ƒл€ чего став€т развернутую реакцию агглютинации с живой и гретой культурами эшерихий?

«адание

1. ѕолучите у преподавател€ чашки ѕетри с засе€нной на среде Ёндо культурой и произведите пересев на пробирку со скошенным агаром.

2. ¬озьмите у преподавател€ культуру Ёѕ ѕ на скошенном агаре, смойте изотоническим раствором натри€ хлорида. „асть смыва прогрейте на вод€ной бане при 100∞ —. –азведите сыворотку в двух р€дах пробирок и поставьте реакцию агглютинации описанным выше способом.

ѕитательные среды

ƒифференциальные среды Ёндо и Ёћ— служат дл€ выращивани€ кишечных бактерий. ¬ыпускаютс€ в виде сухого порошка. —огласно указани€м на этикетке отвешивают определенное количество сухой среды, раствор€ют в соответствующем количестве воды, кип€т€т, помешива€, и разливают в стерильные чашки ѕетри.





ѕоделитьс€ с друзь€ми:


ƒата добавлени€: 2016-11-22; ћы поможем в написании ваших работ!; просмотров: 1626 | Ќарушение авторских прав


ѕоиск на сайте:

Ћучшие изречени€:

Ѕольшинство людей упускают по€вившуюс€ возможность, потому что она бывает одета в комбинезон и с виду напоминает работу © “омас Ёдисон
==> читать все изречени€...

761 - | 586 -


© 2015-2023 lektsii.org -  онтакты - ѕоследнее добавление

√ен: 0.009 с.