Ћекции.ќрг


ѕоиск:




 атегории:

јстрономи€
Ѕиологи€
√еографи€
ƒругие €зыки
»нтернет
»нформатика
»стори€
 ультура
Ћитература
Ћогика
ћатематика
ћедицина
ћеханика
ќхрана труда
ѕедагогика
ѕолитика
ѕраво
ѕсихологи€
–елиги€
–иторика
—оциологи€
—порт
—троительство
“ехнологи€
“ранспорт
‘изика
‘илософи€
‘инансы
’ими€
Ёкологи€
Ёкономика
Ёлектроника

 

 

 

 


ћикробиологическое исследование. ÷ель исследовани€: вы€вление стрептококка и определение его серовара.




÷ель исследовани€: вы€вление стрептококка и определение его серовара.

ћатериал дл€ исследовани€

1. —лизь из зева (ангина, скарлатина).

2. —оскоб с пораженного участка кожи (рожа, стрептодерми€).

3. √ной (абсцесс).

4. ћоча (нефрит).

5.  ровь (подозрение на сепсис; эндокардит).

—пособы сбора материала


—пособы сбора материала

ќсновные методы исследовани€

1. Ѕактериологический.

2. ћикроскопический.

’од исследовани€

ѕервый день исследовани€


ѕервый день исследовани€

¬торой день исследовани€

¬ынимают чашки из термостата и просматривают. ѕри наличии подозрительных колоний из части их делают мазки, окрашивают по √раму и микроскопируют. ѕри обнаружении в мазке стрептококков часть оставшейс€ колонии пересевают в пробирки на агар с сывороткой дл€ выделени€ чистой культуры и на бульон с кровью в пробирках.   концу дн€ 5-6-часовую культуру из бульона или агара пересевают на бульон ћартена с 0,25% глюкозы дл€ определени€ серологической группы в реакции преципитации по Ћенсфильд. ѕробирки и флаконы помещают в термостат и оставл€ют до следующего дн€.

“ретий день исследовани€

¬ынимают посевы из термостата, провер€ют чистоту культуры на скошенном агаре, делают мазки, окрашивают по √раму и микроскопируют. ѕри наличии чистой культуры стрептококка производ€т посев на среды √исса (лактозу, глюкозу, мальтозу, сахарозу и маннит), молоко, желатин, 40% желчь и став€т в термостат.

ѕросматривают бульон ћартена. ѕри наличии специфического роста став€т реакцию преципитации по Ћенсфильд дл€ определени€ серологической группы.

ѕостановка реакции преципитации по Ћенсфильд. —уточную культуру, выросшую на бульоне ћартена, разливают в несколько центрифужных пробирок, центрифугируют в течение 10-15 мин (3000 об/мин).

Ќадосадочную жидкость сливают в банку с дезинфицирующим раствором, а осадок заливают стерильным изотоническим раствором натри€ хлорида и вновь центрифугируют.   осадку, собранному из всех центрифужных пробирок, прибавл€ют 0,4 мл 0,2% хлороводородной кислоты. «атем пробирку помещают в вод€ную баню и кип€т€т 15 мин, периодически встр€хива€. ѕосле кип€чени€ полученную взвесь вновь центрифугируют. јнтиген при этом экстрагируетс€ в надосадочную жидкость, которую сливают в чистую пробирку и нейтрализуют 0,2% раствором гидроксида натри€ до рЌ 7,0-7,2. ¬ качестве индикатора прибавл€ют бромтимоловый голубой (0,01 мл 0,04% раствора). ѕри указанной реакции цвет мен€етс€ от соломенно-желтого до голубого.

«атем в 5 преципитационных пробирок разливают по 0,5 мл антистрептококковых групповых сывороток, которые готов€т иммунизацией кроликов (см. главу 19). ¬ 1-ю пробирку внос€т сыворотку ј, во 2-ю - сыворотку ¬, в 3-ю - сыворотку —, в 4-ю - сыворотку D, в 5-ю - изотонический раствор натри€ хлорида (контроль). ѕосле этого пастеровской пипеткой во все пробирки по стенке осторожно наслаивают полученный экстракт (антиген).

ѕри положительной реакции в пробирке с гомологичной сывороткой на границе экстракта с сывороткой образуетс€ тонкое молочно-белое кольцо (рис. 38).


–ис. 38. —хема выделени€ и идентификации стрептококка

„етвертый день исследовани€

ѕроизвод€т учет результатов (табл. 25).


“аблица 25. ‘ерментативные свойства стрептококка

ѕримечание. к - расщепление углеводов с образованием кислоты.

¬ насто€щее врем€ определ€ют дезоксирибонуклеазу, а также антистрептогиалуронидазу, антистрептолизин-ќ.

 онтрольные вопросы

1.  акие основные методы лабораторного исследовани€ дл€ вы€влени€ стрептококков ¬ы знаете?

2. ƒл€ чего став€т реакцию преципитации по Ћенсфильд?

3. ѕочему антиген при постановке этой реакции должен быть прозрачным? ќпишите технику постановки этой реакции.

«адание

ѕолучите у преподавател€ антистрептококковыс сыворотки ј, ¬, —, D и изотонический раствор натри€ хлорида. ѕоставьте реакцию преципитации, результаты покажите преподавателю и зарисуйте.

ѕитательные среды

јгар с кровью (см. главу 7).

јгар с сывороткой (см. главу 7).

—реды √исса (сухие).

ћ€сопептонный желатин (ћѕ∆).   100 мл ћѕЅ прибавл€ют 10-15 г мелко нарезанного желатина. ∆елатин должен набухать при медленном нагревании в вод€ной бане (при температуре 40-50∞ —).   расплавленному желатину прибавл€ют 10% раствор натри€ карбоната (питьева€ сода) и устанавливают рЌ 7,0. «атем сразу фильтруют через складчатый фильтр. ‘ильтрование идет медленно. ƒл€ ускорени€ процесса фильтрацию можно производить в гор€чем автоклаве. ѕрофильтрованную среду разливают в пробирки по 6-8 мл и стерилизуют. —терилизацию производ€т либо дробно при температуре 100∞ — 3 дн€ подр€д, либо одномоментно при 110∞ — 20 мин в автоклаве. ќхлаждение среды производ€т в пробирках, поставленных вертикально.

ѕриготовление молока. —вежее молоко довод€т до кипени€, став€т в прохладное место на сутки, освобождают от сливок, вновь кип€т€т. ќставл€ют на сутки и снимают верхний слой. ќбезжиренное молоко фильтруют через слой ваты, затем подщелачивают 10% раствором натри€ карбоната до рЌ 7,2 и разливают в пробирки по 5-6 мл.

Ѕульон ћартена.   м€сной воде прибавл€ют равное количество пептона ћартена (фарш из свиных желудков, подвергшихс€ воздействию хлороводородной кислоты). ѕолученную смесь кип€т€т 10 мин, подщелачивают 10% раствором гидроксида натри€ до рЌ 8,0, добавл€ют 0,5 натри€ ацетата, вновь кип€т€т и разливают в стерильную посуду.   бульону ћартена прибавл€ют 0,25% глюкозы.

—реда  итта - “ароцци (см. главу 34).

Streptococcus pneumoniae (пневмококк)

ѕневмококки впервые описаны –.  охом (1871).

ћорфологи€. ѕневмококки - это диплококки, у которых стороны клеток, обращенные друг к другу, уплощены, а противоположные стороны выт€нуты, поэтому они имеют ланцетовидную форму, напоминающую плам€ свечи (см. рис. 4). –азмер пневмококков 0,75-0,5 × 0,5-1 мкм, располагаютс€ они парами. ¬ жидких питательных средах часто образуют короткие цепочки, приобрета€ сходство со стрептококками. ѕревмококки неподвижны, не имеют спор, в организме образуют капсулу, окружающую оба кокка. ¬ капсуле содержитс€ термоустойчивое вещество антифагин (защищающий пневмококк от фагоцитоза и действи€ антител). ѕри росте на искусственных питательных средах пневмококки утрачивают капсулу. ѕневмококки грамположительны. ¬ старых культурах встречаютс€ грамотрицательные бактерии.

 ультивирование. ѕневмококки - факультативные анаэробы. –астут при температуре 36-37∞ — и рЌ среды 7,2-7,4. ќни требовательны к средам, так как не могут синтезировать многие аминокислоты, поэтому растут только на средах с добавлением нативного белка (крови или сыворотки). Ќа агаре с сывороткой образуют мелкие, нежные, довольно прозрачные колонии. Ќа агаре с кровью вырастают влажные колонии зеленовато-серого цвета, окруженные зеленой зоной, что €вл€етс€ результатом перехода гемоглобина в метгемоглобин. ѕневмококки хорошо растут в бульоне с добавлением 0,2% глюкозы и в бульоне с сывороткой. –ост в жидких средах характеризуетс€ диффузным помутнением и пылевидным осадком на дне.

‘ерментативные свойства. ѕневмококки обладают довольно выраженной сахаролитической активностью. ќни расщепл€ют: лактозу, глюкозу, сахарозу, мальтозу, инулин с образованием кислоты. Ќе ферментируют маннит. ѕротеолитические свойства у них выражены слабо: молоко они свертывают, желатин не разжижают, индол не образуют. ѕневмококки раствор€ютс€ в желчи. –асщепление инулина и растворение в желчи €вл€етс€ важным диагностическим признаком, отличающим Streptococcus pneumoniae от Streptococcus pyogenes.

‘акторы патогенности. ѕневмококки продуцируют гиалуронидазу, фибринолизин и др.

“оксинообразование. ѕневмококки образуют эндотоксин, гемолизин, лейкоцидин. ¬ирулентность пневмококков св€зана также с наличием в капсуле антифагина.

јнтигенна€ структура и классификаци€. ¬ цитоплазме пневмококков имеетс€ общий дл€ всей группы протеиновый антиген, а в капсуле - полисахаридный антиген. ѕо полисахаридному антигену все пневмококки раздел€ют на 84 серовара. —реди патогенных дл€ человека наиболее часто встречаютс€ I, II, III серовары.

”стойчивость к факторам окружающей среды. ѕневмококки относ€тс€ к группе нестойких микроорганизмов. “емпература 60∞ — губит их через 3-5 мин.   низким температурам и высушиванию они довольно устойчивы. ¬ высушенной мокроте сохран€ют жизнеспособность до 2 мес. Ќа питательной среде они сохран€ютс€ не более 5-6 дней. ѕоэтому при культивировании необходимо делать пересевы через каждые 2-3 дн€. ќбычные растворы дезинфицирующих веществ: 3% фенол, сулема в разведении 1:1000 губ€т их через несколько минут.

ќсобенно чувствительны пневмококки к оптохину, который убивает их в разведении 1:100000.

¬осприимчивость животных. ≈стественным хоз€ином пневмококков €вл€етс€ человек. ќднако пневмококки могут вызвать заболевани€ у тел€т, €гн€т, порос€т, собак и обезь€н. »з экспериментальных животных к пневмококку высокочувствительны белые мыши.

»сточники инфекции. Ѕольной человек и бактерионоситель.

ѕути передачи. ¬оздушно-капельный путь, может быть воздушно-пылевой.

¬ходные ворота. —лизиста€ оболочка верхних дыхательных путей, глаз и уха.

«аболевани€ у человека. ѕневмококки могут вызвать гнойно-воспалительные заболевани€ разной локализации. —пецифическими дл€ пневмококков €вл€ютс€:

1) крупозна€ пневмони€;

2) ползуча€ €зва роговицы;

3) отит.

Ќаиболее частым заболеванием €вл€етс€ крупозна€ пневмони€, захватывающа€ одну, реже две или три доли легкого. «аболевание протекает остро, сопровождаетс€ высокой температурой, кашлем. «аканчиваетс€ обычно критически.

»ммунитет. ѕосле перенесенного заболевани€ остаетс€ нестойкий иммунитет, так как пневмони€ характеризуетс€ рецидивами.

ѕрофилактика. —водитс€ к санитарно-профилактическим меропри€ти€м. —пецифическа€ профилактика не разработана.

Ћечение. »спользуют антибиотики - пенициллин, тетрациклин и др.

 онтрольные вопросы

1. ћорфологи€ пневмококков.  ультивирование и ферментативные свойства.

2.  акие факторы обусловливают патогенность пневмококков и что защищает пневмококки от фагоцитоза?

3. „то €вл€етс€ основными воротами пневмококковой инфекции.  акие заболевани€ вызывают пневмококки?





ѕоделитьс€ с друзь€ми:


ƒата добавлени€: 2016-11-22; ћы поможем в написании ваших работ!; просмотров: 1529 | Ќарушение авторских прав


ѕоиск на сайте:

Ћучшие изречени€:

Ќе будет большим злом, если студент впадет в заблуждение; если же ошибаютс€ великие умы, мир дорого оплачивает их ошибки. © Ќикола “есла
==> читать все изречени€...

748 - | 586 -


© 2015-2023 lektsii.org -  онтакты - ѕоследнее добавление

√ен: 0.011 с.