Ћекции.ќрг


ѕоиск:




 атегории:

јстрономи€
Ѕиологи€
√еографи€
ƒругие €зыки
»нтернет
»нформатика
»стори€
 ультура
Ћитература
Ћогика
ћатематика
ћедицина
ћеханика
ќхрана труда
ѕедагогика
ѕолитика
ѕраво
ѕсихологи€
–елиги€
–иторика
—оциологи€
—порт
—троительство
“ехнологи€
“ранспорт
‘изика
‘илософи€
‘инансы
’ими€
Ёкологи€
Ёкономика
Ёлектроника

 

 

 

 


¬з€тие и доставка в лабораторию проб фекалий




–укой в резиновой перчатке берут примерно 100 г фека≠лий из пр€мой кишки животных или только что выделивших≠с€ при испражнении. ¬ последнем случае берут пробу с верх≠ней части экскрементов, не соприкасавшейс€ с полом или поч≠вой. –уку и пинцет после вз€ти€ каждой пробы тщательно моют. ѕробы от мелких животных берут с помощью груши. ¬ращательными движени€ми наконечник груши ввод€т в пр€≠мую кишку. ѕри сдавливании груши воздух входит в кишку. «атем наконечник груши вынимают. Ёта манипул€ци€ вы≠зывает рефлекторный акт дефекации. ѕосле каждого вз€ти€ пробы наконечник груши тщательно промывают. ¬з€тый материал регистрируют в описи сопроводительного доку≠мента.

 аждую пробу помещают в пакетик из плотной бумаги или целлофановый, нумеруют и отправл€ют в лабораторию с описью в сопроводительном документе. ¬ нем указывают хоз€йство, отделение или владельца животных, вид и количество их в стаде (отаре, табуне), дату вз€ти€ проб и цель исследо≠вани€.

¬ лабораторию отправл€ют пробы не более суточной дав≠ности со времени их вз€ти€. ѕри исследовании на диктиокаулез и стронгилоидоз пробы следует доставл€ть в лабораторию не позже чем через 4 ч после вз€ти€.

≈сли нет возможности своевременно доставить пробы в лабораторию, их можно консервировать, использу€ дл€ этой цели физические и химические методы консервации.

»з физических методов наиболее распространенным и простым €вл€етс€ воздействие низких температур. ѕробы по≠мещают в холодильник при температуре +2Е-4∞—, что задерживает развитие личинок.

ћожно использовать и различные химические средства:

ü жидкость Ѕарбагалло (3%-ный раствор формалина в изо≠тоническом растворе натри€ хлорида). ¬ ней пробы фекалий могут сохран€тьс€ до двух недель;

ü смесь, состо€щую из формалина (5 мл), глицерина (5 мл) и воды (100 мл);

ü смесь, состо€щую из 0,2%-ного натри€ азотнокислого (1900 мл), раствора Ћюгол€ (250 мл), формалина (300 мл) и глицерина (25 мл).

 

√ельминтоскопи€

 

ƒл€ обнаружени€ гельминтов в фекали€х их смешивают с водой (1:10) и смеси дают отсто€тьс€. „ерез некоторое вре≠м€ (не менее 5 мин) верхний слой воды сливают, а к осадку приливают новую порцию воды. “ак повтор€ют несколько раз, что позвол€ет удалить большую часть посторонних веществ, а в осадке остаютс€ паразиты и нерастворимые т€желые час≠ти фекалий. «атем осадок исследуют макро- и микроскопи≠чески.

ћакроскопическое исследование. ѕромытый осадок фе≠калий вновь разбавл€ют водой, небольшими порци€ми нали≠вают в черную кювету и при медленном покачивании ее вни≠мательно просматривают осадок. ћожно брать осадок неболь≠шими порци€ми, выливать в чашки ѕетри и просматривать под лупой или микроскопом. Ќекоторых гельминтов лучше просматривать на белом фоне. ѕоэтому рекомендуют одну половину кюветы окрашивать в черный цвет, другую Ц в бе≠лый. “ак последовательно просматривают весь материал. ќбнаруженных паразитов выбирают препаровальной иглой или кисточкой и фиксируют.

ћикроскопическое исследование. ƒл€ обнаружени€ мел≠ких форм паразитов отмытый осадок исследуют в бактерио≠логических чашках с помощью штативной лупы (6-10-крат≠ное увеличение).

 

√ельминтоовоскопи€

ќборудование и средства. ƒл€ проведени€ гельминтоовоскопии необходимо следующее оборудование и материалы: микроскоп биологический (ћЅ») или микроскоп биологичес≠кий стереоскопический (ћЅ—), предметные и покровные стек≠ла, бактериологические чашки, пинцеты, ножницы, стекл€нные палочки, фарфоровые ступки и пестики, стаканчики из стекла или синтетического материала с верхним диаметром 4-5 см (мензурки в форме усеченного конуса на 50 мл), можно ис≠пользовать баночки ‘лоринского, ситечки с металлической или покровной сеткой (кусочки чулочной ткани или марли) с ве≠личиной сторон €чеек 0,25-0,3 мм, центрифужные пробирки, центрифуга до 2 тыс. об/мин, металлические петли с диамет≠ром кольца 5-8 мм, спиртова€ или газова€ горелка, флотаци≠онные растворы, десенсиметр дл€ проверки плотности флота≠ционных растворов, глицерин, молочна€ кислота, глазные пипетки, целлофанова€ пленка.

ѕриготовление флотационных растворов. Ќасыщенный раствор натри€ хлорида (NaCl). ¬ эмалированное ведро с кип€щей водой порци€ми кладут соль, посто€нно помешива€ дерев€нной лопаточкой до полного ра≠створени€. —оль добавл€ют до тех пор, пока она не начинает выпадать в осадок. ƒл€ приготовлени€ раствора требуетс€ 420 г соли на 1 л воды. ¬ гор€чем виде раствор фильтруют через марлю. ѕри остывании раствора кристаллы хлорида натри€ выпадают в осадок, что свидетельствует о плотности насыщенного раствора, равной 1,18-1,20.

–аствор свинца нитрата (азотнокис≠лого свинца) (Pb(NO3)2). —оль раствор€ют в гор€чей воде порци€ми при подогревании и посто€нном помешивании до полного растворени€. Ќа 1 л воды требуетс€ 650 г соли. ‘ильтровать раствор не об€зательно. ѕлотность насыщенно≠го раствора 1,5. ќн обладает высокой флотационной способностью. ќднако уже через 24 ч после приготовлени€ плот≠ность несколько падает за счет выпадени€ частиц соли в оса≠док. ѕоэтому перед употреблением раствор подогревают с размешиванием осадка. ѕлотность уточн€ют десенсиметром.

Ќитрат свинца Ц соль т€желого металла, при работе с ним следует соблюдать осторожность.

–аствор аммони€ нитрата (NH43) готов€т так же, как и предыдущий раствор. Ќа 1 л воды расходуют 1500 г гранулированного порошка аммониевой селитры. ѕлот≠ность раствора нитрата аммони€ должна быть 1,5.

–аствор натри€ нитрата (NaNO3) готов€т путем добавлени€ на 1 л воды 1 кг азотнокислого натри€. ѕлотность раствора равна 1,38-1,40.

–аствор цинка сульфата (ZnSO4∙7H2O) приготавливают при добавлении на 1 л воды 400 г сернокис≠лого цинка. ≈го плотность равна 1,24.

–аствор натри€ тиосульфата (Nа2S2ќ3∙5Ќ2ќ) с плотностью 1,4 готов€т путем добавлени€ к 1л воды 1750 г вещества.

–аствор магни€ сульфата (MgSO4) с плотностью 1,26-1,28 готов€т путем добавлени€ 920 г соли yа 1 л воды.

 

ћетоды седиментации

ћетод последовательных промываний примен€ют дл€ ди≠агностики трематодозов. ѕробу фекалий (3-5 г) кладут в стаканчик или фарфоровую ступку, заливают небольшим ко≠личеством воды и, размешива€ стекл€нной палочкой (в ступке пестиком), добавл€ют воду до 50-100 мл. —месь фильтруют через ситечко или марлю (1 слой) и отстаивают 3-5 мин. «атем верхний слой сливают, а к осадку добавл€ют такое же количество воды и процедуру повтор€ют до тех пор, пока надосадочный слой не будет прозрачным. ¬ерхний слой слива≠ют, а осадок порци€ми разливают в чашки ѕетри или на пред≠метное стекло и микроскопируют.

ћодификаци€ метода по “.√. Ќикулину. ”читыва€, что при последовательном сливании надосадочной жидкости про≠исходит взмучивание, осадок и часть €иц трематод могут быть слиты. “.√. Ќикулин предложил отсасывать надосадочную жидкость грушей. ѕри массовых исследовани€х на наконеч≠ник груши надевают кружок из картона (ограничитель). ѕо≠скольку во всех пробах в стаканчиках остаетс€ одинаковое количество осадка и он не взмучиваетс€, результаты исследо≠ваний €вл€ютс€ более достоверными.

ћетод седиментации с целлофановыми пленками по √.ј.  отельникову и ¬.ћ. ’ренову предложен дл€ диагно≠стики фасциолеза и дикроцелиоза жвачных, аскариоза и трихоцефалеза свиней. »з гидрофильного целлофана толщиной 22 мкм нарезают пр€моугольные кусочки 2x3 см и помещают их на 24 ч в бактериологическую чашку с 50%-ным раство≠ром молочной кислоты или глицерина на одни сутки.

ѕосле приготовлени€ целлофановых пленок берут пробу фекалий массой 2 г и размешивают в стаканчике с небольшим количеством воды. ¬звесь фильтруют через металлическое ситечко или марлю (1 слой) в чистый стакан емкостью 50 мл, отстаивают 15 мин, сливают надосадочную жидкость, а к осад≠ку добавл€ют 35-40 мл водопроводной воды, оп€ть отстаива≠ют 5 мин, надосадочную жидкость сливают, осадок перенос€т на предметное стекло и покрывают целлофановой пленкой. „ерез 8-10 мин провод€т микроскопию препарата. –аствор молочной кислоты или глицерина просветл€ет препарат, а плен≠ка предохран€ет его от высыхани€.

‘лотационно-седиментационный метод Ќ.¬. ƒемидо≠ва примен€ют дл€ диагностики фасциолеза. ѕробу фекалий (от крупного рогатого скота Ц 5 г, от овец Ц 3 г) помещают в большой стакан, заливают доверху насыщенным раствором натри€ хлорида и тщательно размешивают стекл€нной палоч≠кой до получени€ равномерной взвеси. ¬звесь отстаивают 15-20 мин, затем чайной ложечкой или совочком удал€ют всплывшие па поверхность грубые частицы. ∆идкость отсасывают грушей (при массовом исследовании допускаетс€ сливание), оставл€€ 20-30 мл ее над осадком, к осадку доливают воду до полного объема стакана и тщательно размешивают палоч≠кой. ¬звесь фильтруют в большие стаканы, фильтрат отстаи≠вают в течение 5 мин (дл€ фильтрации используют марлю или металлическое ситечко с €чейками 0,25 мм), жидкость из стаканов отсасывают, оставл€€ на дне 15-20 мл осадка. ќса≠док перемешивают в конических стаканчиках, большие стака≠ны прополаскивают водой и выливают, смыв в маленькие, взвесь отстаивают в конических стаканчиках 3-5 мин, а жидкость отсасывают. Ёту процедуру повтор€ют до просветлени€ надосадочной жидкости, затем осадок перенос€т на предметное стек≠ло и микроскопируют.

 

ћетоды флотации

ћетод ‘юллеборна. ¬ стакане емкостью 200 мл разме≠шивают 8-10 г свежих фекалий с 20-кратным объемом насы≠щенного раствора натри€ хлорида. ѕосле тщательного разме≠шивани€ смесь фильтруют через металлическое или капроно≠вое ситечко (можно через марлю) в другой чистый стакан емкостью 100 мл и оставл€ют на 45-60 мин. «атем проволоч≠ной петлей с поверхности взвеси берут 3-6 капель и нанос€т на хорошо обезжиренное предметное стекло, покрывают по≠кровным стеклом и микроскопируют.

ћетод ƒарлинга. ѕробу свежих фекалий массой 5 г сме≠шивают в стакане с водой в соотношении 1:10 и через ситечко или марлю процеживают в другой чистый стакан. ‘ильтрат отстаивают 5 мин, верхний слой жидкости сливают, не взмучи≠ва€ осадка, а осадок с небольшим количеством оставшейс€ жидкости (10 мл) перенос€т в центрифужную пробирку и центрифугируют 2 мин при скорости 1500 об/мин. Ќадоса≠дочную жидкость сливают, а к осадку приливают жидкость ƒарлиига (глицерин, смешанный в равных част€х с насыщен≠ным раствором хлорида натри€). ѕробирку встр€хивают или размешивают палочкой, чтобы осадок смешалс€ с флотацион≠ной жидкостью, повторно центрифугируют в течение 2 мин при скорости 1500 об/мин. ѕри наличии в пробе фекалий €иц гельминтов они всплывают на поверхность жидкости в центрифужной пробирке. √ельминтологической петлей берут 3-4 капли с поверхности взвеси, нанос€т на предметное стек≠ло и микроскопируют.

ћетод ».ј. ўербовича выполн€ют по такой же методике, как и ƒарлинга, но в качестве флотационной жидкости используют насыщенные растворы натри€ гипосульфита или магни€ сульфата. ѕоскольку плотность указанных растворов выше, чем плотность жидкости ƒарлинга, метод ўербовича используют дл€ диагностики гельминтозов, €йца возбудителей которых имеют больший удельный вес (метастронгилез сви≠ней, трихоцефалез, макраканторинхоз и др.).

ћетод √.ј.  отельникова и ¬.ћ. ’ренова наиболее эффективен при диагностике нематодозов, эймериозов и других паразитозов животных. ќн выполн€етс€ в двух вари≠антах.

—уть первого варианта состоит в том, что пробу фекалий массой 3 г кладут в стаканчик, добавл€ют раствор аммиачной селитры и тщательно размешивают стекл€нной палочкой. «а≠тем порци€ми доливают раствор соли до 50 мл. ѕолученную взвесь фильтруют через металлическое или капроновое си≠течко в другой стаканчик и дают отсто€тьс€ в течение 10 мин. ѕри диагностике стронгил€тозов достаточно, чтобы взвесь от≠сто€лась в течение 3-5 мин. ѕосле этого гельминтологичес≠кой петлей с поверхности взвеси снимают 3-6 капель с раз≠ных мест, перенос€т их на предметное стекло и микроскопируют.

¬торой вариант Ц метод флотации с аммиачной селитрой и с центрифугированием Ц это модификаци€ метода ƒарлинга при использовании в качестве флотационной жидкости на≠сыщенного раствора аммиачной селитры. ќн оказываетс€ очень эффективным при диагностике р€да цестодозов, аскаридатозов, стронгил€тозов и других паразитов.

√ельминтоларвоскопи€

ќборудование и средства. “ермостат, центрифуга, мик≠роскоп биологический (ћЅ») или микроскоп биологический стереоскопический (ћЅ—), аппарат Ѕермана, чашки бактериологические, баночки ‘лоринского, часовые и предметные стекла, пипетки глазные, марл€, вата, 0,1%-ный водный раствор метиленового синего, насыщенный раствор цинка сульфата, центрифужные пробирки, пинцеты, ножнички, топка€ м€гка€ проволока, конические стаканчики, стекл€нные палочки, ра≠створ Ћюгол€.

ћетод Ѕермана. ѕробы свежих фекалий (10 г) помещают завернутыми в марлю или на металлическую сетку в воронку аппарата Ѕермана. ѕредварительно резиновую труб≠ку, присоединенную к воронке, закрывают зажимом и в ворон≠ку заливают воду комнатной температуры (35-38∞—). ‘ека≠лии мелких жвачных оставл€ют в воронке на 4-6 ч, крупного рогатого скота и лошадей Ц на 10-12 ч. «а это врем€ личин≠ки диктиокаулюсов выползают из пробы фекалий в воду и постепенно опускаютс€ по трубке вниз к зажиму. ѕо истече≠нии указанного времени зажим открывают и жидкость из ниж≠ней части трубки осторожно сливают в бактериологическую чашку и исследуют под микроскопом.

ћетод Ѕермана-ќрлова €вл€етс€ модификацией метода Ѕермана. ¬ аппарате Ѕермана на конец резиновой трубки за≠жим не устанавливают, а плотно присоедин€ют пробирку. ѕри помещении в воронку с теплой водой фекалий личинки гельминтов оседают на дно пробирки. ѕо истечении необходимого срока (дл€ мелкого рогатого скота Ц 4-6 ч, дл€ крупного рогатого скота и лошадей Ц 10-12 ч) пробир≠ку отсоедин€ют от резиновой трубки, жидкость аккуратно сли≠вают или отсасывают пипеткой, а осадок помещают на пред≠метное стекло или чашку ѕетри и микроскопируют.

ћетод ».ј. ўербовича. ѕробу фе≠калий (8-10 г) помещают на кусочек марли, концы которой закручивают тон≠кой м€гкой проволокой и подвешивают в стакан с водой температурой 35-38∞—. ѕробы фекалий мелких живот≠ных и лошадей выдерживают в течение 3 ч, крупного рогатого скота Ц 12 ч. «атем пробу фекалий из стакана извлекают, воду осторожно (не взбол≠тать) сливают, осадок помещают в центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 1 мин со скоростью 1000 об/мин. Ќадосадочную жидкость в пробирке сливают, осадок перено≠с€т на предметное стекло и микроскопируют.

ћетод ¬айда. Ќа предметное или часовое стекло кладут несколько шариков свежевыделенных фекалий овец или коз и добавл€ют небольшое количество воды температурой около 40∞—. ≈сли шарики помещают на предметное стекло, достаточно нескольких капель воды. „ерез 40 мин шарики удал€≠ют, оставшуюс€ жидкость на стекле исследуют под микроско≠пом па наличие личинок. ћетодика эффективна при условии, если фекалии плотные. ѕримен€ют дл€ диагностики диктиокаулеза, мюллериоза, протостронгилеза, цистокаулеза овец и коз.

‘лотаци€ с раствором цинка сульфата Ц избиратель≠ный экспресс-метод диагностики диктиокаулеза по  отельникову и ’ренову. ѕробы фекалий (по 5 г) овец и коз кладут в стаканчик с раствором цинка сульфата, в течение 1-2 мин энергично разгон€ют по кругу, не растира€ и не размешива€. Ќе менее чем через 5-10 мин пробы вынимают пинцетом, взвесь оставл€ют на 10-15 мин. «атем металлической пет≠лей снимают 6 капель с поверхности жидкости, перенос€т на предметное стекло и микроскопируют.

ѕробы от овец полужидкой консистенции и пробы от тел€т (5 г) также помещают в стаканчики с раствором цинка сульфата и выдерживают 20-30 мин без разгонки и размешива≠ни€. «атем фекалии удал€ют, через несколько минут снимают металлической петлей 6 капель с поверхности пленки и мик≠роскопируют. Ћичинки диктиокаулюсов в поверхностной плен≠ке сохран€ют подвижность до 3 ч. ћетод обладает избира≠тельностью в отношении личинок диктиокаулюсов. Ћичинки стронгил€т пищеварительного тракта и стронгилоидов дефор≠мируютс€ и разрушаютс€ в течение 1-2 мин, личинки мюллериусов свертываютс€ спирально и напоминают пузырьки воз≠духа.





ѕоделитьс€ с друзь€ми:


ƒата добавлени€: 2016-11-20; ћы поможем в написании ваших работ!; просмотров: 9784 | Ќарушение авторских прав


ѕоиск на сайте:

Ћучшие изречени€:

ѕобеда - это еще не все, все - это посто€нное желание побеждать. © ¬инс Ћомбарди
==> читать все изречени€...

1418 - | 1347 -


© 2015-2024 lektsii.org -  онтакты - ѕоследнее добавление

√ен: 0.015 с.