Ћекции.ќрг


ѕоиск:




 атегории:

јстрономи€
Ѕиологи€
√еографи€
ƒругие €зыки
»нтернет
»нформатика
»стори€
 ультура
Ћитература
Ћогика
ћатематика
ћедицина
ћеханика
ќхрана труда
ѕедагогика
ѕолитика
ѕраво
ѕсихологи€
–елиги€
–иторика
—оциологи€
—порт
—троительство
“ехнологи€
“ранспорт
‘изика
‘илософи€
‘инансы
’ими€
Ёкологи€
Ёкономика
Ёлектроника

 

 

 

 


ћетоды иммуноферментного анализа в диагностике




Ѕолезней животных

(’олод ¬.ћ., ћацинович ј.ј.)

»ммуноферментный анализ (»‘ј) Ц относитс€ к группе иммунохимических методов биохимического исследовани€. ћетод основан на специфическом взаимодействии антитела (ат) с антигеном (аг) Ц специфические компоненты реакции. ¬ разных вариантах постановки метода ј√ или ј“, помечаетс€ так называемой ферментной меткой. ѕоследн€€ представл€ет собой очищенный фермент высокой активности, присоединенный посредством физико-химического взаимодействи€ к молекуле ат или аг. ‘ермент используетс€ дл€ визуализации иммунного взаимодействи€. Ќа последнем этапе постановки реакции добавл€етс€ субстрат, на который воздействует фермент с образованием специфического продукта. ≈ще одним принципиальным условием постановки метода €вл€етс€ отделение, образующегос€ иммунного комплекса от других составл€ющих реакционной среды. Ёто достигаетс€, как правило, адсорбцией одного из специфических компонентов реакции на каком-то носителе (чаще всего на материале из которого изготовлена емкость, в которой ставитс€ реакци€). «атем посредством отмывани€ от мешающих компонентов в реакционной среде остаетс€ только искомый иммунный комплекс, с ферментной меткой к которому добавл€етс€ субстрат.

“еоретически метод основываетс€ на одном из фундаментальных законов химии - законе действи€ масс. ѕрименительно к данному методу используетс€ частный вывод из закона Ц количество меченого антигена, св€завшегос€ с антителами будет обратно пропорционально количеству определ€емого антигена:

гЦјт]

јгтгЦјт;   = ¾¾¾¾¾¾, где

г]*[јт]

 - константа равновеси€ обратимой реакции,

г] - концентраци€ антигена;

т] - концентраци€ антитела;

гЦјт] - концентраци€ комплекса антиген-антитело.

 

¬ состо€нии равновеси€ отношение св€занного антигена (¬) к свободному (F) определ€етс€ соотношением:

 

¬/F= [јг*јт ]/[јгисх]- [јгсв ], где

 

[јгисх] - исходна€ концентраци€ антигена;

[јгсв ] - количество антигена, св€занного в виде комплекса јг*јт.

 

ћеченый антиген ведет себ€ так же, как и немеченый, и отношение концентрации св€занного антигена и свободного описываетс€ тем же уравнением.

ќтсюда следует, что если концентраци€ немеченого антигена јг (определ€емого агента) будет увеличена при посто€нной концентрации меченого антигена (јг), то первый св€зывает большее число антител. ¬ результате концентраци€ св€занного меченого антигена (јгх јт) снизитс€ и отношение св€занного меченого антигена к свободному (¬х/Fх) будет уменьшатьс€ с увеличением в инкубационной смеси немеченого (определ€емого) антигена. ѕоэтому отношение ¬х/Fx €вл€етс€ количественной характеристикой определ€емого антигена.

ћетод »‘ј €вл€етс€ историческим продолжением радиоиммунологического метода (–»ј) широко используемого дл€ определени€ концентрации гормонов и до насто€щего времени. ћетоды »‘ј были разработаны в начале 70-х годов ’’ века. ћетод иммуноферментного анализа имел р€д преимуществ перед методом радиоиммунологического анализа.

1. ¬ нем не использовались радиоактивные изотопы. ќтсутствие радиационной опасности значительно упрощает услови€ проведени€ реакции.

2. ћеченые соединени€, используемые в »‘ј более устойчивы и посто€нны (в –»ј они устойчивость зависит от периода полураспада изотопов.)

3. ¬озможность быстрого определени€ результатов ферментативной реакции с помощью обычных общедоступных приборов (фотометров). ¬озможность даже визуальной оценки реакции.

4. »‘ј легко поддаетс€ автоматизации.

„увствительность и специфичность »‘ј определ€етс€ качеством иммунной сыворотки. Ќеобходимо использовать только высокоавидные и высоко специфические антитела. ¬ насто€щее врем€ качественный иммуноферментный диагностикум должен изготавливатьс€ на основе моноклональных јт.

ѕринципиально следует раздел€ть методы »‘ј на вида: конкурентный »‘ј и неконкурентный »‘ј. ¬ первом случае в реакционную смесь внос€т заранее известное количество меченого јг или јт, которые в соответствие с законом действи€ масс конкурируют за специфическое взаимодействие с јг или јт, наход€щимс€ в исследуемом материале. ѕри неконкурентном методе происходит отделение продукта специфической иммунной реакции - комплекса јг-јт и проведение последующей специфической реакции с меченным јт к этому комплексу.  онкурентный вариант »‘ј используетс€ в большей степени дл€ определени€ концентраций веществ, а неконкурентный метод Ц это метод полуколичественного определени€ веществ и расчет концентрации в данном случае проводитс€ по титру или в условных единицах измерени€. Ќеконкурентный вариант »‘ј используетс€ дл€ вы€влени€ сложных јг или јт, с множеством антигенных детерминант, таких возбудители инфекционных заболеваний, или антитела к возбудител€м инфекционных и паразитарных заболеваний.

“ак же метод »‘ј по технике постановки реакции раздел€ют на гомогенный »‘ј (EMJT) в котором образовавшийс€ при взаимодействии иммунный комплекс не отдел€етс€ от других компонентов реакции и твердофазный (ELISA) Ц в этом случае јг или јт иммобилизировано на твердом носителе (пробирке, стенке полистеролловой лунке и т.д.).

ћетодом »‘ј может быть определено любое вещество, которое вступает в специфическое иммунно-химическое взаимодействие и на которое или на образовавшийс€ иммунный комплекс в организме продуценте иммунных тел развиваетс€ иммунитет.

»‘ј в ветеринарной практике используют в следующих направлени€х.

1. ƒиагностика инфекционных и паразитарных заболеваний. ќна может основыватьс€ на определении концентрации јт к возбудител€м заболеваний в сыворотке крови или на определении в органах и ткан€х јг (то есть непосредственно возбудител€). ѕроизводител€ми из различных стран выпускаетс€ большой спектр диагностикумов дл€ диагностики различных заболеваний крупного рогатого скота, птицы, свиней и др. видов животных. Ќаиболее распространенными в нашей стране диагностикумами дл€ »‘ј €вл€ютс€ диагностикумы производства: ‘√” Ђ¬Ќ»»∆«ї (–осси€) Ц наборы дл€ диагностики инфекционных заболеваний птиц (»Ѕ , Ѕ√, »ЅЅ, микоплазмоза птиц, сальмонеллеза, ——я-76 и др.); Sinbiotic (CЎј) Ц так же наборы дл€ диагностики инфекционных заболеваний птиц; AideX (—Ўј) - наборы дл€ диагностики инфекционных заболеваний крупного рогатого скота, свиней и птиц (в том числе Ц дл€ диагностики лейкоза крупного рогатого скота, классической чумы свиней, ––—); Ќѕ‘ ЂЌарвакї - наборы дл€ диагностики инфекционных заболеваний кошек (панлейкемии), - собак (чума собак, инфекционный гепатит и др.), - крупного рогатого скота (вирусной диареи, »–“ и др.), - свиней ( „—, ––—, парвовирусной инфекции и др.), - птиц.

2. √ормонодиагностика Ц определение концентрации гормонов дл€ диагностики эндокринных заболеваний, глубоких нарушений обмена веществ и нарушений воспроизводительной функции. –азработаны методы определени€ гормонов, как белковой природы, так и стероидной. ѕри этом определ€ютс€ как основные формы гормонов, так и промежуточные их метаболиты. Ќаиболее часто в ветеринарной практике определ€ютс€ концентраци€ прогестерона, тестостерона, эстрадиола и его метаболитов, трийод- и тетрайодтиронина.

3. ќпределение остаточных количеств лекарственных препаратов и токсических соединений в животноводческой продукции. –азработаны методы определени€ антибиотиков и микотоксинов.

4. ќпределение микотоксинов в кормах дл€ животных с целью определени€ пригодности к скармливанию. ‘√” ЂЌ»» ветеринарной санитарииї (–осси€) разработаны и производ€тс€ наборы дл€ определени€ концентрации микотоксинов (зерааленона, ƒќЌа, афлатоксинов и др.). Ёти наборы широко используютс€ в ветеринарных лаборатори€х –еспублики, наставлени€ по их применению утверждены.

 





ѕоделитьс€ с друзь€ми:


ƒата добавлени€: 2016-11-20; ћы поможем в написании ваших работ!; просмотров: 549 | Ќарушение авторских прав


ѕоиск на сайте:

Ћучшие изречени€:

—туденческа€ общага - это место, где мен€ научили готовить 20 блюд из макарон и 40 из доширака. ј майонез - это вообще десерт. © Ќеизвестно
==> читать все изречени€...

2106 - | 2021 -


© 2015-2024 lektsii.org -  онтакты - ѕоследнее добавление

√ен: 0.012 с.