Ћекции.ќрг


ѕоиск:




 атегории:

јстрономи€
Ѕиологи€
√еографи€
ƒругие €зыки
»нтернет
»нформатика
»стори€
 ультура
Ћитература
Ћогика
ћатематика
ћедицина
ћеханика
ќхрана труда
ѕедагогика
ѕолитика
ѕраво
ѕсихологи€
–елиги€
–иторика
—оциологи€
—порт
—троительство
“ехнологи€
“ранспорт
‘изика
‘илософи€
‘инансы
’ими€
Ёкологи€
Ёкономика
Ёлектроника

 

 

 

 


¬з€тие материала дл€ лабораторных исследований




 

ѕосле вскрыти€ трупов животных дл€ подтверждени€ предварительного диагноза болезни провод€т бактериологическое, вирусологическое, гистологи≠ческое, химическое и другие лабораторные исследовани€. ƒл€ этого при вскры≠тии отбирают соответствующий патологический материал, который направл€ют в ветеринарные лаборатории.

ƒл€ бактериологического исследовани€ патологический материал берут как можно раньше после смерти животного, особенно и теплое врем€ года, так как материал от разложившегос€ трупа дл€ исследовани€ не пригоден.

ѕатологический материал дл€ бактериологического исследовани€ от≠правл€ют в лабораторию в неконсервированном виде. ≈сли же нет возможности доставить его в лабораторию в течение суток, то патологический материал консервируют в 30-50% - ном водном растворе химически чис≠того глицерина.  оличество консервирующей жидкости должно быть в 4-5 раз больше объема патологического материала.

ћатериал дл€ вирусологического исследовани€ необходимо брать от вынужденно убитых животных или от трупов не позже, чем 1-1,5 часа после смерти.

≈го направл€ют в замороженном виде в термосе со льдом. “акже консервируют 30-50%-ным водным раствором химически чис≠того глицерина на изотоническом (0,9-ном) растворе натри€ хлорида.

“рупы небольших животных (порос€т, €гн€т, тел€т, птицы) посылают целыми в непроницаемой таре с нарочным.

ƒл€ гистологического исследовани€ от свежих трупов павших или выну≠жденно убитых животных из разных участков патологически измененных орга≠нов и тканей вырезают тонкие кусочки длиной и шириной 1-2 см, толщиной не более 1 см, помещают их в стекл€нные с 10%-ным водным раствором формалина (10 мл продажного формалина на 90 мл воды). ќбъем консерванта берут в 10 раз больший, чем объем вз€того материала. ¬ формалине его фиксируют в течение 2-5 суток, причем жидкость через сутки с начала фиксации замен€ют свежей. ¬ зимнее врем€ фиксацию провод€т в теплом помещении.

Ќа банку, где консервируют кусочки органов, наклеивают €рлык с указа≠нием номера или клички животного, внутрь опускают этикетку из плотной бу≠маги с теми же надпис€ми простым карандашом или шариковой ручкой. ≈сли в одну посуду помещают несколько кусочков от разных животных, то каждый из них зав€зывают в марлю вместе с отдельной этикеткой.

ƒл€ химико-токсикологического исследовани€ в лабораторию направл€ют в отдельных стекл€нных или глин€ных банках часть пищевода и желудка с содержимым (0,5 кг), отрезки тонкого и толстого кишечника (40 см длиной, 0,5 кг), перев€≠занные с обоих концов, часть печени (0,5 кг) с желчным пузырем, почку, мочу (0,5 л), скелетные мышцы (0,5 кг). ¬з€тый материал не обмывают водой, не консервируют и отправл€ют с нарочным в опечатанных банках.

Ќа посылаемый патологический материал составл€етс€ сопроводитель≠ный документ по определенной форме. ¬ запечатанном конверте его посылают вместе с материалом с нарочным или почтой. ¬ сопроводительном письме ука≠зывают вид, пол и возраст животного, от которого вз€т материал, его номер или кличку, количество банок с материалом, на какое исследование посылаетс€, кратко описывают клинические признаки и патологоанатомические изменени€.   письму могут быть приложены дополнительные сведени€.

ћетоды диагностики заразных болезней

(јлешкевич ¬.Ќ.)

Ѕактериологическое исследование примен€етс€ дл€ вы€влени€ патогенных бактерий в материале от больных животных или их трупов, обнаружение микробов в объектах внешней среды, кормах, м€се и т.д.

»сследуемый материал по возможности собирают в асептических услови€х в стерильную посуду (от трупов не позднее 2-3 часов после смерти животных, в р€де случаев целесообразен вынужденный убой 1-2-х из группы больных животных) и доставл€ют в ближайшее врем€ в не консервированном, консервированном(30%-ым водным раствором глицерина или вазелиновым маслом, 0,5%-ым раствором фенола), замороженном (допускаетс€ при туберкулезе и др.) виде с сопроводительным документом в лабораторию (в нем указаны дата вз€ти€, характер и источник материала, основные клинические признаки болезни и патологоанатомические изменени€, цель исследовани€).

Ѕактериологические исследование включает: бактериоскопию мазков исследуемого материала, выделение чистой культуры бактерий с последующим изучением морфологических, культуральных, биохимических, антигенных и патогенных свойств бактерий.

ћикроскопи€ позвол€ет обнаружить в материале микробов, изучить их морфологию (форму, размер, взаимное расположение клеток, структурные компоненты: капсулы, споры, жгутики, включени€) и тинкториальные свойства. ƒл€ этого из патологического материала готов€т мазки-отпечатки из органов, тканей или препараты-мазки из другого исследуемого материала, высушивают на воздухе, фиксируют (чаще фламбированием или химическим способом) и окрашивают тем или иным методом в зависимости от направленности исследовани€. ќкраску микробов провод€т простым (один краситель) и сложным методами(основной и дополнительный краситель, вспомогательные реактивы).—ложные методы (√рама, ÷иль-Ќильсена, –омановского-√имза, √инса и др.)позвол€ют отличить одну группу микробов от другой, вы€вить отдельные элементы микробной клетки(споры, капсулы).

ƒл€ обнаружени€ некоторых бактерий (напр., возбудител€ туберкулеза) патологический материал предварительно обрабатывают одним из методов обогащени€, повыша€ в нем концентрацию бактерий и избавл€€сь от посторонних микробов.

ѕри обнаружении бактерий используют и люминесцентную микроскопию. ƒл€ определени€ подвижности микробов используют микроскопию молодой (12-24 ч.) живой культуры с помощью препаратов Ђраздавленна€ или вис€ча€ капл€ї, а также на основе роста бактерий в полужидком ћѕј.

¬ыделение культуры бактерий провод€т путем посева материала на соответствующие (в зависимости от питательных потребностей возбудител€) питательные среды. ѕосев на плотные питательные среды в бактериологических чашках провод€т путем растирани€ шпателем нескольких капель материала по поверхности среды. ѕри исследовании паренхиматозных органов убитых или павших животных обжигают или фламбируют кусочек органа, затем надрезают его стерильными ножницами и с помощью пинцета провод€т надрезанной поверхностью по питательной среде в чашке. ¬ жидкую среду посев материала делают пастеровской пипеткой. — целью получени€ роста изолированных колоний (при их пересеве получают чистую культуру бактерий) микробов чаще используют дробный посев или пересев (метод ƒригальского) на несколько чашек с плотной средой. „истую культуру получают также высева€ патматериал на элективные среды, заражением лабораторных животных и прогреванием содержащего споры материала в вод€ной бане при 800 — 30 мин.

«асе€нные чашки и пробирки инкубируют в термостате при оптимальной дл€ роста каждого вида бактерий температуре (чаще 370 —) в течение обычно 1-2 суток (некоторых случа€х до 30-60 суток, например возбудитель туберкулеза).

ƒл€ идентификации выделенных бактерий изучают только чистые культуры. »дентификацию провод€т всесторонним изучением их культуральных, морфологических, биохимических, серологических и патогенных свойств.

ѕри оценке роста на жидких питательных средах определ€ют степень и характер помутнени€ среды, характер осадка, наличие пленки и пристеночного кольца. ѕри изучении роста микробов на твердых средах обращают внимание на характер роста (скудный, пышный, однородный или неоднородный), число колоний, их величину, форму, структуру, цвет, прозрачность.

Ѕиохимическую активность изучают чаще всего на дифференциально-диагностических средах (√исса,  лиглера, Ёндо,  ристенсена и др.), определ€€ при этом сахаролитические, протеолитические и редуцирующие свойства.

јнтигенную структуру микробов изучают при помощи различных серологических реакций Ц –ј, –Ќ, –ѕ, –—  и др., позвол€ющих вы€вить различи€ между близкородственными видами некоторых бактерий, а также отдельными штаммами внутри вида.

‘аготипирование, как метод идентификации микробов, провод€т при помощи бактериофагов.

ќпределение патогенных свойств бактерий провод€т путем заражени€ лабораторных животных культурами или фильтратом культуры (при определении токсинообразовани€).

ѕосле изучени€ свойств бактерий сопоставл€ют полученные данные с признаками бактерий, имеющимис€ в соответствующих инструкци€х, √ќ—“ах по лабораторной диагностике инфекционных заболеваний, определителе микробов (ƒ.Ѕерджи, 1994) и провод€т их родовую и видовую дифференциацию. ¬ сомнительных случа€х провод€т повторное исследование материала. –езультаты исследовани€ записывают в журнал бактериологических экспертиз, указыва€ какой микроб выделен из исследуемого материала.

¬ирусологическое исследование Ц комплекс методов исследовани€, позвол€ющее распознать этиологию вирусного заболевани€ и изучить его возбудител€.

’арактер и методика вз€ти€ проб при различных вирусных болезн€х неодинаковы. ѕри вз€тии материала дл€ выделени€ вируса следует исходить из плюрализма вирусов. ≈го отбирают с учетом патогенеза изучаемой инфекции, как можно быстрее после по€влени€ четких признаков болезни или не позднее 2-3 часов после смерти или убо€ (наблюдаетс€ феномен посмертной аутостерилизации и посмертных изменений тканей) и быстро помещают в услови€ низкой температуры. ћатериал отправл€ют в лабораторию в термосе с услови€ми поддержани€ низкой температуры, в стекл€нных флаконах (пробирках) с притертыми пробками, либо консервированном виде 50%-ным растровом глицерина.

»сследование необходимо начинать сразу после поступлени€ материала. ≈сли по каким-то причинам (отсутствие эмбрионов птиц, тканевых культур) оно откладываетс€, присланный материал необходимо поместить в низко Ц температурный морозильник при Ц 27Е40Е700—. —начала провод€т исследовани€, позвол€ющие непосредственно вы€вить вирус или его антигены в материале Ц световую, люминесцентную (метод иммунофлюоресценции), электронную микроскопию и иммуноферментный анализ.

—ветова€ и люминесцентна€ микроскопи€ используетс€ дл€ обнаружени€ крупных вирусов (в. оспы), вы€влени€ внутриклеточных включений (напр. Ѕабеша-Ќегри при бешенстве), изучени€ цитопатогенного действи€ вируса на клетки (÷ѕƒ), определени€ типа нуклеиновой кислоты вируса (метод флюорох-ромировани€). ƒл€ световой микроскопии препараты из патологического материала окрашивают специальными методами: по ћорозову, ћаккиавелло, –ома-новскому-√имзе Ц при вы€влении вирионов; по ћуромцеву, ћанну, “уревичу и др. Ц при вы€влении включений. ƒл€ люминесцентной микроскопии при окраске препаратов используют флуорохромы (акридин оранжевый и др.). Ёлектронна€ микроскопи€ (используют специально приготовленные препараты) позвол€ет вы€вл€ть вирусные частицы в различных материалах, дифференцировать их по форме, размеру и ультраструктуре. ћетод иммунофлюоресценции провод€т с помощью иммунных сывороток меченных флюорохромами с целью индикации, идентификации вирусов и вирусных агентов.

»ммуноферментный анализ (»‘ј) примен€етс€ в гистохимическом и твердофазном варианте, где используютс€ антитела меченные ферментами (пероксидаза хрена, щелочна€ фосфатаза и др.). √истохимический вариант »‘ј предназначен дл€ идентификации вируса в патматериале или культуре клеток. “вердофазный вариант »‘ј используетс€ как дл€ определени€ антигенов, так и определени€ антител и их титров в цел€х ретроспективной диагностики.

ƒл€ выделени€ вируса используют эмбрионы птиц, культуры клеток, лабораторных и естественно-восприимчивых животных. ѕодготовку вируссодержащего материала дл€ заражени€ чувствительных объектов осуществл€ют двум€ методами: с помощью обработки антибиотиками или путем стерилизующего фильтровани€. «атем материал подвергают бактериологическому контролю на наличие бактерий, грибов путем посева на ћѕј, ћѕЅ, ћѕѕЅ, среду —абуро и при отрицательных результатах используют дл€ заражени€. ѕри получении отрицательных результатов провод€т не менее трех пассажей на биологических объектах того же вида.

ѕри выделении в испытуемом материале вирусного агента следующим этапом исследовани€ €вл€етс€ идентификаци€ вируса (видова€ и группоспецифическа€) с помощью серологических методов. — этой целью используют –Ќ, –— , –»ƒ, –“√јд, –«√ј, –Ќ√ј, »‘ј. ƒанные методы позвол€ют вы€вить также и антитела в сыворотках переболевших животных. ѕри этом необходимо иметь две пробы сыворотки крови (парные сыворотки), вз€тые в начале и в конце болезни (обычно через 14 дней). ’ранить сыворотки необходимо в холодильнике при 40 — или в замороженном виде, строго соблюда€ пор€док нумерации проб и соответстви€ записей в журнале и на пробах.

¬ насто€щее врем€ в лаборатори€х дл€ идентификации возбудител€ используетс€ полимеразна€ цепна€ реакци€ (ѕ÷–), позвол€юща€ определить нуклеотидную последовательность –Ќ  или ƒЌ  инфекционного агента.

–езультаты исследовани€ записывают в журнал вирусологических исследований. ƒиагноз на инфекционную болезнь может быть поставлен при учете эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных и результатов лабораторных исследований.

 

ћикологическое исследование Ц комплекс методов, примен€емых дл€ обнаружени€ и идентификации грибов в исследуемом материале.

ћикологическое исследование при диагностике микозов включает микроскопию патологического материала дл€ обнаружени€ возбудител€ в органах и ткан€х больного животного, выделение чистой культуры и ее идентификацию. ¬ не€сных случа€х провер€ют патогенность выделенных культур биологической пробой. ƒополнительно используют серологический, аллергический, люминесцентный методы диагностики. √истологическое исследование примен€ют дл€ диагностики глубоких микозов, возбудитель которых не культивируетс€ на питательных средах (риноспоридиоз).

ќтбор патологического материала при дерматомикозах производ€т с периферии свежих, пораженных очагов (корочки, волосы); при эпизоотическом лимфангите, споротрихозе, актиномикозе, актинобациллезе материал извлекают из не вскрывшихс€ абсцессов, а также исследуют гранулематозные очаги после предварительной дезинфекции их; при висцеральных микозах исследуют гной, мочу, органы и ткани, соскобы со слизистых оболочек. ѕатологический материал помещают в стерильные чашки ѕетри (при дерматофитозах можно в чистые стерильные пакеты). ƒл€ лучшего вы€влени€ элементов грибов из патологического материала готов€т препараты на предметном стекле в капле 10-20%-ного раствора едкого натра с последующим добавлением 50%-ного водного раствора глицерина. ћикроскопируют неокрашенные препараты (реже окрашенные по √раму, лактофуксином, хлопчатобумажной синью, –омановскому-√имзе) при малом увеличении, затем при х40. Ћучшие результаты исследовани€ дает фазово-контрастна€ микроскопи€.

ѕервичную культуру возбудителей получают посевом патологического материала на агар —абуро, сусло-агар, кров€ной агар и др.(10-12 пробирок). ѕри загр€знении посторонней микрофлорой можно применить предпосевную обработку патологического материала (700 этиловым спиртом или 2-4%-ным раствором формалина 3-6 мин.) или добавить антибиотики в питательную среду. ќптимальный рЌ питательной среды дл€ патогенных грибов составл€ет 6,0-7,2, температура культивировани€ 26-300 —, дл€ отдельных представителей 370 —. ѕосевы выдерживают до 30 суток, так как первичные культуры чаще развиваютс€ медленно (напр. Tr. verrucosum). »дентификацию культур провод€т по культурально-морфологическим признакам, ферментативной активности на специальных средах. ѕри микроскопии культур (непосредственно в чашках или препаратах) вы€вл€ют мицеальные т€жи, склероции, плодовые тела, строение и характер ветвлени€ спорангиеносцев, конидиеносцев, форму спорангиев, расположение конидий (цепочками или одиночно), отношение к окраске. ѕатогенность культур провер€ют заражением белых мышей, морских свинок, кроликов через скарифицированную кожу, подкожно, интраперитониально, внутривенно, ингал€ционным методом. —ерологические реакции (агглютинации, преципитации, –—  и др.), аллергические внутрикожные пробы примен€ют в комплексе с другими методами при диагностике преимущественно кандидамикоза, гистоплазмоза, эпизоотического лимфангита. Ћюминесцентным методом вы€вл€ют у животных микроспорию.

ƒл€ микологического исследовани€ при диагностике микотоксикозов берут средние пробы из партий кормов, вызвавших алиментарное отравление животных. ѕредварительно исключают инфекционные болезни, отравлени€ €довитыми растени€ми и €дохимикатами. »спользуют органолептический, микологический, токсико-биологический и физико-химический методы.

ѕри органолептическом анализе учитывают влажность, цвет, запах, иногда вкус, а также видимые поражени€ корма грибами. ћикологическое исследование включает: первичное выделение грибов из кормов, количественный учет и дифференциацию их, выделение чистых культур грибов. ¬ыделение токсичных вариантов грибов из исследуемых образцов корма Ц решающий момент в диагностике микотоксикозов. “оксичность образцов корма и культур грибов определ€ют кожной пробой на кроликах, простейших (инфузори€х стилонихи€х) и скармливанием лабораторным животным. ‘изико-химический анализ заключаетс€ в изол€ции, качественном и количественном определении в кормах и культурах грибов афлатоксинов, микотоксина (“-2), зеараленона (‘-2) путем тонкослойной хроматографии в сочетании с люминесцентной микроскопией.

 

ƒиагностика паразитозов

( арасев Ќ.‘.)





ѕоделитьс€ с друзь€ми:


ƒата добавлени€: 2016-11-20; ћы поможем в написании ваших работ!; просмотров: 1125 | Ќарушение авторских прав


ѕоиск на сайте:

Ћучшие изречени€:

Ћибо вы управл€ете вашим днем, либо день управл€ет вами. © ƒжим –он
==> читать все изречени€...

1955 - | 1698 -


© 2015-2024 lektsii.org -  онтакты - ѕоследнее добавление

√ен: 0.018 с.