Род микобактерий включает облигатно-патогенные, условно-патогенные и непатогенные для человека и животных виды. По способности расти на питательных средах микобактерии делят на 3 группы:
1) медленно растущие – видимый рост на средах возникает через 2-4 недели или позднее;
2) быстро растущие – рост на средах отмечается на 1-й неделе;
3) не растущие на искусственных питательных средах.
Виды микобактерий
M.tuberculosis – возбудители туберкулеза у человека. Характеризуются медленным ростом, который стимулируется глицерином. Редуцируют нитраты, образуют никотиновую кислоту (проба на ниацин положительная), ферментируют мочевину, образуют каталазу, которая разрушается при 68 градусах, образуют никотинамидазу, высоко вирулентны для морских свинок.
M.bovis – возбудители внелегочных форм туберкулеза у человека. Характеризуются более медленным ростом, чем M.tuberculosis, рост стимулируется сниженной концентрацией кислорода. Пробы на никотинамидазу, уреазу, ниациновый тест, восстановление нитратов отрицательны, каталаза инактивируется при 68 градусах.
M.africanum – выделена от больных туберкулезом, проживающих в тропической зоне Африки, занимает промежуточное положение между первым и вторым видами.
M.kansassii – вызывает хроническое заболевание легких, похожее на туберкулез. Возбудитель характеризуется медленным ростом, образует желтый пигмент, проба с ниацином отрицательная, проба на никотинамидазу, уреазу положительная, редуцирут нитраты, гидролизует Твин-80, каталаза активна при 68 градусах.
M.avium – возбудитель туберкулеза у птиц, иногда у человека, растет медленно, образуя гладкие пигментированные колонии. Каталаза активна при 68 градусах. Редуцирует нитраты, мочевину не разлагает. Для морских свинок непатогенен.
M.ulcerans – возбудитель кожных поражений у людей в тропических и субтропических странах. Характеризуется медленным ростом, образует пигмент, выделяет каталазу, которая активна при 68 градусах.
M.fortuitum – возбудитель болезни у скота и овец, изолируют при абсцессах у человека, характеризуется быстрым ростом на простых средах, в том числе в присутствии 5% хлорида натрия, образуя гладкие пигментированные колонии. Каталаза активна при 68 градусах. Пробы с ниацином и на никотинамидазу отрицательны.
M.smegmae – выделяют из смегмы человека, почвы, воды, характеризуются быстрым ростом на яичных средах, в том числе в присутствии 5% хлорида натрия, образуя гладкие колонии. Редуцирует нитраты, гидролизует Твин-80, проба на никотинамидазу положительна, с ниацином – отрицательна, каталазная активность вариабельна. Непатогенен для человека.
M.leprae – возбудитель лепры.
Патогенное действие M.tuberculosis связано с прямым и иммунологическим действием липидов и липидосодержащих структур: воск и фтионовые кислоты обладают токсичностью, грануломогенностью, активируют макрофаги; С-микозиды создают защитный экран вокруг микобактерий.
Лабораторная диагностика различных форм туберкулеза используется не только для выявления туберкулезных микобактерий, но и для прогнозирования течения болезни, выбора рациональной противотуберкулезной терапии и оценки ее эффективности. Широкое применение антибактериальной терапии привело к изменению морфологии возбудителя, характера колоний, вирулентности для животных, что усложнило бактериологическую диагностику, идентификацию и дифференциацию палочек туберкулеза от других микобактерий.
Микробиологическое исследование проводится с целью выявления возбудителя. Материалом для исследования служат: мокрота, экссудат из плевральной полости, асцитическая жидкость, испражнения, моча, спинномозговая жидкость. Мокроту, лучше всего утреннюю, собирают в чистую (стерильную) баночку, закупоривающуюся пробкой. Нужно объяснить больному, что он не должен собирать носоглоточную слизь и слюну, а только отделяемое из дыхательных путей, предварительно почистив зубы и прополоскав рот. Если мокрота отделяется скудно, то накануне больному следует дать отхаркивающее. Более ценным материалом для исследования при отсутствии мокроты являются промывные воды бронхов, которые получают при бронхоскопии.
Экссудат из плевральной полости и асцитическую жидкость берут стерильным шприцем в стерильную колбу с соблюдением правил асептики. Испражнения собирают в стерильную банку. Мочу собирают стерильным катетером в стерильную банку; спинномозговую жидкость (3–5мл) берут стерильной иглой, соблюдая правила асептики, в 1–2 стерильные пробирки, закрывают ватно-марлевыми пробками, оставляют при комнатной температуре, через 24 часа на поверхности образуется пленка (нежная сеточка), в которой находятся микобактерии туберкулеза.
Основные методы лабораторного диагноза:
- бактериоскопический
- бактериологический
- биологический
- аллергический
- серологический
Бактериоскопический метод. Является основным и наиболее распространенным. Он применяется для обнаружения туберкулезных бактерий в мазках из материала, окрашенных по Цилю-Нильсену. Материалом для исследования, чаще всего, служит мокрота. Перед исследованием мокроту выливают в чашки Петри, поставленные на черном фоне, выбирают гнойные комочки, наносят на середину предметного стекла, плотно прикрывают его другим предметным стеклом, помещая его так, чтобы осталась свободной левая треть нижнего стекла и правая треть верхнего стекла. Взяв за свободные концы, стекла раздвигают в стороны и получают два больших мазка. Мазки окрашивают по методу Циля-Нильсена.
При микроскопии мочи, экссудата из плевральной полости, асцитической жидкости берут осадок после центрифугирования, при микроскопии спинномозговой жидкости исследуют пленку. Просмотреть нужно не менее 80–100 полей зрения, так как микобактерии туберкулеза могут быть обнаружены, если в 1 мл мокроты их не менее 100 000.
Бактериологический метод. Бактериологический метод является более эффективным, так как позволяет выявить микобактерии туберкулеза, если их содержится около 100 в 1 мл исследуемого материала. Кроме того, этот метод позволяет изучить и идентифицировать выделенную культуру, определить ее чувствительность к противотуберкулезным препаратам.
Биологический метод. Является одним из достоверных методов диагностики туберкулеза. Самым чувствительным животным к микобактериям туберкулеза человеческого типа являются морские свинки. При введении им материала, содержащего единичные и даже одну микробную клетку, возникает заболевание и гибель животного через 6–12 недель.
Из органов делают мазки-отпечатки и изучают их, окрашивая по Цилю-Нильсену. В настоящее время этот метод используется редко, так как применение химиотерапевтических препаратов привело к формированию лекарственноустойчивых форм микобактерий, которые авирулентны для морских свинок. Кроме того, этот метод длителен во времени, результат биологической пробы получают через 2–3 месяца.
Аллергический метод. Применяется для выявления инфицированности человека путем постановки туберкулиновых проб.
Серологический метод. Имеет ограниченное применение. Обычно используют ИФА, реакцию связывания комплемента (РСК), реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА). Реакции ставят по общепринятой методике.
В результате самостоятельной работы студент должен знать:
1. Классификацию и характеристику биологических свойств возбудителей туберкулеза, проказы, микобактериозов
2. Эпидемиологию, патогенез, восприимчивость и иммунитет при туберкулезе и проказе
3. Основные клинические проявления заболеваний, вызываемых патогенными и условно-патогенными микобактериями
4. Принципы лабораторной диагностики туберкулеза, проказы и микобактериозов
5. Препараты для идентификации, лечения и профилактики туберкулеза
Уметь:
1. Красить препараты по Цилю-Нильсену
2. Интерпретировать результаты аллергической пробы Манту
3. Классифицировать бактериальные препараты в соответствии с их назначением.
