Оборудование:
1. силиконизированные и несиликонизированные пробирки;
2. секундомер;
3. водяная баня на 37°С;
4. стеклянные палочки.
Ход работы: пробирки нагревают до 37 СС, В силиконизиро-ванную пробирку до метки 2 мл набирают кровь из вены. При появлении в пробирке первых капель крови включают секундомер. 1 мл из силиконизированной пробирки переливают без вспенивания в несиликонизированную пробирку до метки 1 мл. Через 2 мин, а затем через каждые 30 с пробирки легко наклоняют, не встряхивая, на 50—60° и следят, натекает ли кровь на стенки пробирки. Пока кровь не свернулась, она растекается по стенкам. Момент свертывания замечают по секундомеру и записывают.
Затем стеклянной палочкой отделяют сгусток от стенки пробирки. Компактный сгусток при наклоне пробирки легко скользит по ее стенкам.
В норме у людей от 15 до 60 лет время свертывания в несиликонизированновой пробирке при 37 °С 5—7 мин, при 20—25 °С — 6—11 мин, в силиконизированной — соответственно — 15—25 и 15—35 мин.
Результат: ______________________________________________________
__________
Вывод______________________________________________________________
________________________
Выделение холестерина из мозговой ткани
Ход работы. Мозговую ткань в количестве 0,5 г растирают •в фарфоровой ступке с двойным по объему или тройным по весу количеством гипса. Полученную массу намазывают тонким слоем на стеклянную пластинку и высушивают на воздухе или в сушильном шкафу. Сухую массу снимают скальпелем и растирают в фарфоровой ступке до гомогенного порошка. Порошок переносят в сухую пробирку, добавляют 3 мл хлороформа и, закрыв пробирку корковой пробкой, взбалтывают 5—10 минут. По окончании встряхивания жидкость фильтруют через маленький складчатый фильтр, смоченный хлороформом. С фильтратом проделывают цветные реакции на холестерин
Результат: ______________________________________________________
__________
Вывод______________________________________________________________
________________________
Выделение фосфатидов из мозговой ткани
Ход работы. Мозговую ткань в количестве 0,5—1 г помещают в пробирку, добавляют 3—5 мл горячего спирта и нагревают на водяной бане при температуре 50—60° в течение 10—15 минут, тщательно перемешивая содержимое стеклянной палочкой. По окончании экстракции жидкость фильтруют в сухую пробирку и с фильтратом проделывают реакцию на лецитин.
В широкую пробирку наливают 10 капель спиртового раствора лецитина
и добавляют 10 или 20 капель 10% NaOH и кипятят 3-5 минут. В результате гидролиза лецитин распадается на составные части. Фиксируют запах.
Результат: ______________________________________________________
__________
Вывод______________________________________________________________
________________________
Оценка транспортной функции сывороточного альбумина
Принцип метода Определяют содержание альбумина в сыворотке крови и количество альбумина, связывающегося с раствором конго красного, после чего вычисляют процент альбумина, связанного с красителем. Альбумин является неспецифическим транспортером веществ, его связывающая способность важна для оценки фармакокинетики и фармакодинамики лекарств.
Реактивы, исследуемый материал:
1) кристаллический альбумин человека; 2) конго красный, 0,1% раствор; 3) №С1, насыщенный раствор; 4) №С1, 0,9% раствор.
Ход работы
1. Готовят реагенты для построения калибровочного графика связывания красителя со стандартным раствором альбумина, содержащим 100; 75; 50; 25; 6,25 и 3,125 г альбумина в 1 л 0,9% раствора N301. К 5 мл 0,1% раствора конго красного добавляют по 0,1 мл раствора альбумина из каждого разведения.
2. В 5 мл 0,1% раствора конго красного помещают 0,1 мл исследуемой сыворотки. Через 30 мин в пробирки добавляют по 5 мл насыщенного раствора №С1 и помещают на 24 ч в термостат при 37 "С. Затем содержимое пробирок фильтруют. К 0,1 мл фильтрата добавляют 5 мл воды и измеряют оптическую плотность при А, 530 нм в кювете толщиной 10 мм.
Строят график зависимости величины оптической плотности от концентрации альбумина, по которому определяют количество альбумина, связанного с красителем в исследуемой сыворотке. Отдельно определяют количество альбумина в данной сыворотке. Затем рассчитывают транспортную функцию альбумина. Например, количество альбумина в исследуемой сыворотке составило 60 г/л, а количество альбумина, связанного с красителем, — 25 г/л. Составляют пропорцию: 60 — 100%, а 25 — х%; х = 40%. У здоровых людей этот показатель, отражающий транспортную функцию альбумина, составляет 92%.
Результат: ______________________________________________________
__________
Вывод______________________________________________________________
________________________
