Обнаружение и идентификация сайтов ацетилирования гемоглобинов крысы и человека при их взаимодействии с ацетилсалициловой кислотой in VItro

 

Шрейнер Е.В.,¹ Дубровский Я.А.²,Мурашко Е.А.³

¹ Санкт-Петербургский государственный университет,

Санкт-Петербург, Россия.

Студент V курса.

[email protected]

² ФГУП НИИ ГПЭЧ ФМБА, Санкт-Петербург, Россия. Аспирант 3г.

³ ФГУП НИИ ГПЭЧ ФМБА, Санкт-Петербург, Россия. Молодой учёный.

Научный руководитель: Подольская Е.П.

 

Белки и секретируемые пептиды могут приобретать различные посттрансляционные модификации аминокислот в полипептидной цепи. В настоящее время описано более ста посттрансляционных модификаций белков и пептидов. Такие модификации как фосфорилирование, гликозилирование, ацетилирование, как правило, имеют важное функциональное значение и влияют на биологические функции белков; ряд других модификаций не имеет функционального значения. Кроме того, посттрансляционные модификации секреторных белков возможны и неприродными соединениями, например, лекарственными средствами и другими органическими веществами.

На сегодняшний день для решения подобных задач успешно привлекаются методы масс-спектрометрии, позволяющие не только зафиксировать факт связывания белка с лекарственным препаратом, но и идентифицировать ковалентную модификацию.

Цель данной работы - выявить сайты ацетилирования глобина человека и крысы при инкубации 0.1 мг/мл АСК с цельной кровью в течение 3 часов.

Для выявления аддуктов исследовали триптический гидролизат гемоглобина человека и крысы выделенного из цельной крови. Полученные гидролизаты исследовали с помощью масс-спектрометра MALDI-TOF-TOF Axima Perfomance (Shimadzu/Kratos Analytical, Великобритания). В масс-спектрах проводили поиск сигналов, соответствующих ацетилированным триптическим пептидам глобина и имеющих сдвиг m/z в область больших масс на 42.01 Да. Для подтверждения модификации пептиды были проанализированы методом тандемной масс-спектрометрии с фрагментацией CID.

В результате удалось выявить два сайта ацетилирования по лизину-17 и лизину-57 в альфа - субъединице как для гемоглобина крысы, так и для гемоглобина человека после инкубации in vitro цельной крови с терапевтическими концентрациями АСК (С_АСК = 0.1 мг/мл).

 

 

НОВЫЙ СПОСОБ ОЦЕНКИ СОСТОЯНИЯ МОЧЕВЫВОДЯЩИХ ПУТЕЙ У ДЕТЕЙ ДОШКОЛЬНОГО И МЛАДШЕГО ШКОЛЬНОГО ВОЗРАСТА МАСС-ЧУВСТВИТЕЛЬНЫМ «ЭЛЕКТРОННЫМ НОСОМ»

 

Шуба А.А.,¹ Филонова К.Е.²

¹ Воронежский государственный университет инженерных технологий,

Воронеж, Россия.

Молодой учёный.

[email protected]

² Воронежская государственная медицинская академия им. Н. Н. Бурденко, Воронеж, Россия. Молодой учёный.

Научный руководитель: Кучменко Т.А., Вечеркин В.А.

 

В последнее время увеличилось количество детей в младшем школьном и дошкольном возрасте с инфекционными поражениями мочевыводящих путей. Диагностика данной патологии затруднена, так как общий анализ мочи мало информативен, а микробиологический посев не всегда позволяет обнаружить возбудителя инфекции в короткий срок. Поэтому актуальной задачей является разработка новых способов быстрой неинвазивной диагностики инфекций мочевыводящих путей, в том числе с использованием сенсорных систем и устройств.

Цель работы: оценка возможности применения масс-чувствительного «электронного носа» с хемометрической обработкой многомерных данных для диагностики состояния мочевыводящих путей детей по составу равновесной газовой фазы (РГФ).

Исследование сорбции легколетучих компонентов РГФ над пробами мочи проводили методом пьезокварцевого микровзвешивания на установке «МАГ-8» с 8 измерительными элементами, модифицированными различными сорбентами.

В качестве модификаторов электродов пьезокварцевых резонаторов выбраны пленки стандартных хроматографических фаз, универсальные и специфические покрытия, в том числе на основе углеродных нанотрубок, селективные к аминам различного строения и легколетучим кислотам, выбранным в качестве газов-маркеров инфекционных процессов в мочевыводящем тракте.

В качестве объектов исследования изучены пробы мочи (не более 4 часов после забора) детей с инфекциями мочевыводящих путей разной степени пролеченности антибиотиками, условно здоровых без жалоб и симптомов заболеваний. Для оценки специфичности также исследованы пробы мочи детей с другими заболеваниями (пиелонефрит, цистит, пиелоренальный рефлюкс) и пороками развития мочеполовой системы (крипторхизм).

В качестве сигналов массива пьезосенсоров, используемых для обработки методом главного компонента (МГК) выбраны: аналитические сигналы пьезосенсоров (Δ F _max,i, Гц), параметры эффективности сорбции (A _ij), площадь кинетического «визуального отпечатка» (S_в.о., Гц·с). Для декомпозиции матрицы данных по МГК использовали сигналы массива пьезосенсоров при сорбции РГФ над пробами мочи 30 детей. Параллельно проводился анализ традиционными методами диагностики инфекций мочевыводящих путей (общий анализ мочи, УЗИ, общий и биохимический анализ крови).

Установлено, что оптимальной является модель с пятью ГК (калибровочная и проверочная дисперсия равны 97 и 95 % соответственно) с проверкой тестовым набором. Для скрининг-диагностики достаточно 2 ГК, при этом все образцы разделяются на три группы, при этом первая и вторая ГК отделяют образцы проб мочи детей условно здоровых и пролеченных антибиотиками от остальных образцов. Отдельно можно выделить пробы мочи в процессе лечения, а также пробы мочи больных детей. Третья и четвертая компоненты позволяет выделить пробы с различными заболеваниями. Наиболее сильное влияние на модель оказывают переменные, соответствующие параметрам эффективности сорбции для универсальных пленок и специфических покрытий. При хирургическом вмешательстве независимо от заболевания детектируются метаболиты наркоза, что искажает данные и не позволяет оценить состояние мочевыводящих путей на наличие инфекций.