Бактериологическое исследование
Биологическая проба
4. Ускоренные методы бактериологического исследования - люминесцентно-серологический метод,
1. Чума является чрезвычайно контагиозной, поэтому взятие материала от больного (особенно легочной формы) производится с соблюдением мер предосторожности. Работа в очаге проводится в полном противочумном костюме.
В лабораторию могут быть доставлены следующие материалы:
• содержимое бубона (легочная форма чумы);
• отделяемые язвы или пунктет из карбункула (кожная форма чумы);
• материал из зева, взятый тампоном, и мокрота (легочная форма чумы);
• секционный материал (кусочки органов трупа, кровь);
• живые грызуны;
• трупы грызунов;
• блохи грызунов;
• вода;
• пищевые продукты.
Материал необходимо брать до назначения лечения. Значение микробиологического диагноза огромно, особенно для выявления первых случаев чумы. Предварительный диагноз устанавливают на основании микроскопического исследования материала, окончательный — на основании выделения и идентификации культуры.
Микроскопическое исследование: мазки фиксируют погружением полностью в жидкость Инпифорова на 20 мин. Окраска по Граму обязательна во всех случаях. Одновременно окрашивают мазок метиленовым синим Леффлера, так как этот метод лучше выявляет биполярность.
2. Бактериологическое исследование: посевы исследуемого материала производят на агар добавлением стимуляторов роста (кровь, сульфит натрия). При исследовании материала, обильно загрязненного посторонней микрофлорой (загнившие трупы, мокрота), к агару добавляют генциановый фиолетовый 1: 100 000. В случаях подозрения на наличие бактериофага посевы обрабатывают антифаговой сывороткой. Инкубацию посевов проводят при 28 °С. В положительных случаях через 12 ч появляются колонии в виде характерных "кружевных платочков". Когда чистая культура выделена путем прямого посева, она подлежит идентификации на основании следующих данных.
• внешний вид колонии на агаре;
• характерный рост на бульоне;
• типичная морфология микробов в мазках и отрицательная окраска по Граму;
• типичная патологоанатомическая у лабораторных животных при заражении их чистой культурой;
• агглютинация со специфической сывороткой;
• отношение к специфическому бактериофагу. Исследование ферментативных свойств, подвижности и т. п. производят лишь в специальных случаях для дифференциального диагноза с родственными видами бактерий. Проба с фагом осуществляется на твердых средах путем нанесения капли фага на свежий посев культуры и на жидких — путем добавления в бульонную культуру фага в количестве 1/10 объема культуры. Окончательное заключение делают на основании изучения комплекса признаков исследуемой культуры. При этом не следует забывать о явлении изменчивости.
3. Биологическая проба обязательна при исследовании; наиболее чувствительными из лабораторных животных являются морские свинки и белые мыши. Для постановки биологической пробы животных заражают внутрибрюшинно, подкожно или внутрикожно, а в случае загрязнения материала посторонней микрофлорой — втиранием в скарифицированную кожу.
В зависимости от способа заражения и степени чувствительности к возбудителю животные погибают от чумы на 3—9-й день после инфицирования, изменения во внутренних органах в виде геморрагического воспаления, кровоизлияния: в мазках-отпечатках из органов — множество чумных микроорганизмов; посевы инфицированных органов и крови дают обильный рост возбудителя.
Лечение:
Антибиотикотерапия, но прогноз неблагоприятный
Профилактика:
Живой вакциной (иммунитет до 6 месяцев)
+сан-гиг мероприятния\
Борьба с грызунами
Возбудитель туляремии
Общая характеристика
Род Francisella
Для возбудителя Francisella tularensis как одной из природно-очаговых зоонозных инфекций характерна триада биоиеноза:
• возбудитель;
• резервуары возбудителя;
• переносчики — кровососущие насекомые.
Морфология и культуральные свойства:
· Грамотрицательные палочки
· мелкие размеры — 0,3—0,5 мкм,
· спор не образует
· Неподвижен
· Может образовывать капсулу
· При культивировании на искусственных питательных средах имеет формы очень мелкого кокка
· В культурах на питательных средах бактерии туляремии обнаруживают полиморфизм
· Культурально прихотлив: удается культивировать на желтковых средах при добавлении цистина и других питательных веществ, особенно крови.
· Температурный оптимум 36—37°С.
· Строгие аэробы.
· В жидких питательных средах размножается хуже
Ферментативная активность:
ферментируют до кислоты глюкозу, мальтозу, а в ряде случаев — левулезу и маннозу
Факторы патогенности:
оболочечный Vi-АГ
токсические в-ва типо эндотоксина
Антигенная структура:
• оболочечный (Vi) (осн фактор вирулентности)
• соматический (О).
Патогенность:
Попадает в организм через кожу, слизистые глаз и верхних дых путей, ЖКТ.
Внедрение и первичная адаптация, лимфогенное распространение, первичные регионарно очаговые и общие р-ии организма, гематогенные метастазы и генерализация процесса, вторичные очаги, аллергические изменения, обратный метаморфоз и выздоровление.
Характерна бактериемия, метастазирование и развитие вторичных туляремийных бубонов
Иммунитет:
Сохраняется длительно, иногда пожизненно, аллергизация организма к АГ возбудителя
Диагностика:
Бактериологический метод для диагностики заболевания у человека по сравнению с биологическим методом малоэффективен, так как в организме больного человека туляремийные микробы содержатся в скудном количестве. Для выращивания туляремийных бактерий используют специальные среды, так как на простых питательных средах (мясо-пептонном агаре, бульоне) этот микроб не растет, обычно применяется свернутая желточная среда, рыбно-глюкозо-цистиновый агар и агар с добавлением крови. При массивном обсеменении органов рост культуры туляремийных бактерий появляется через 18—24 ч в виде нежного синего налета на поверхности среды.
Бактериоскопия: ввиду очень мелких размеров туляремийного микроба он может быть с достоверностью обнаружен в мазках-отпечатках из патологического материала только при обильном обсеменении последнего. При изготовлении мазков-отпечатков используют окраску по Романовскому-Гимзе. Путем бактериоскопии (в сочетании с реакцией преципитации) может быть получен быстрый (через 2—3 ч) положительный ответ при исследовании доставленных грызунов. Однако он является лишь предварительным, так как положительные результаты бакте-риоскопического исследования должны быть подтверждены выделением культуры.
Серологические исследования: из серологических методов исследования применяют реакцию агглютинации по общепринятой методике с использованием туляремийного диагноста. Диагностическим считается титр 1: 100 и выше. Более чувствительной является реакция непрямой гемагглютинации, применяемая как для ранней, так и для ретроспективной диагностики. В качестве антигена используют туляремийный эритроцитарный диагностикум.
Лечение:
Антибиотики стрептомицинового и тетрациклинового ряда. В случаях затяжного течения вакцинотерапия с примнением убитой лечебной вакцины.
Профилактика
Борьба с грызунами
Удаление источника инфекции
Вакцинация по эпид показаниям и людям в группе риска
Возбудитель бруцеллеза
Общая характеристика
Возбудители бруцеллеза – острого или хронического антропозоонозного заболевания, которое характеризуется интоксикацией и преимущ поражением ОДА, нервной, СС, мочеполовой систем и других органов, затяжным течением.
Морфология и культуральные свойства:
· очень мелкие бактерии шаровидной, овоидной или палочковидной формы.
· грамотрицательные
· Неподвижны, не образуют спор.
· У вариантов, образующих гладкие и слизистые колонии могут быть выявлены капсулы.
· Легко окрашиваются анилиновыми красителями. В мазках обычно располагаются беспорядочно.
· Облигатные аэробы. B.аbortus лучше растет в присутствии 10% СО2. Растут при температуре от 6 до 45°С,
· оптимальная температура - 37°С.
· их культивирования необходимы сложные питательные среды. Добавление в питательную среду 5% глицерина или сыворотки стимулирует рост бруцелл. Оптимальная среда для культивирования – печеночный агар и печеночный бульон.
· Колонии бруцелл бесцветные, с перламутровым блеском, гладкие, выпуклые. Размеры колоний варьируют от очень мелких (0,01-0,5 мм) до крупных (3-4 мм).
· На жидких средах вызывают помутнение.
· Хорошо растут в неоплодотворенных куриных яйцах, желточном мешке куриного эмбриона.
Ферментативная активность:
Характеризуются слабой биохимической активностью, не обладают гемолитическими свойствами. Для определения вида бруцелл используют их чувствительность к бактериостатическому действию красителей – основного фуксина и тионина, а также способность продуцировать сероводород.
Факторы патогенности:
Бруцеллы не образуют экзотоксин. Одним из основных факторов вирулентности является эндотоксин, представляющий собой липополисахарид клеточной стенки.
Продуцируют гиалуронидазу, каталазу, уреазу. Показано, что бруцеллы выделяют низкомолекулярные продукты, ингибирующие слияние фаго- и лизосом.
Антигенная структура:
О-АГ
Содержат в разных соотношениях А и М-антигены, а также поверхностный L-антиген, сходный с Vi-антигеном сальмонелл.
Резистентность:
Относительно устойчивы в окружающей среде. Сохраняются во влажной почве и воде от 2-3 до 4,5 месяцев; в непроточных водоемах – до 3 месяцев; в молоке – до 273 дней; в масле – до142 дней; в сыре – до 1 года; в брынзе – до 72 дней; в кефире – до 11 дней. Чувствительны к действию высокой температуры: при 55°С погибают в течение 1 часа, при 70°С – 10 минут, при кипячении – через несколько секунд.
Прямые солнечные лучи вызывают гибель бруцелл только через 2-3 дня.
Чувствительны к действию дезинфицирующих веществ.
Патогенность:
Входными воротами при бруцеллезе служат кожа и слизистые оболочки желудочно-кишечного тракта. Бруцеллы, как и возбудители чумы и туляремии, могут проникать даже через неповрежденную кожу. Из места входных ворот бруцеллы по лимфатическим путям попадают в региональные лимфатические узлы (чаще всего это лимфатический аппарат ротовой полости, заглоточные, шейные, подчелюстные железы и лимфатический аппарат кишечника). Такие лимфоузлы превращаются в своеобразные “депо” бруцелл. Из лимфатических узлов возбудитель проникает в кровь и распространяется по всему организму, избирательно поражая ткани лимфо-гемопоэтической системы. При этом часть бруцелл погибает, освобождая эндотоксин. Происходит сенсибилизация организма и формирование гиперчувствительности замедленного типа.
В дальнейшем наблюдается многократная генерализация процесса, что определяет течение болезни по типу хрониосепсиса с упорной наклонностью к рецидивам и выраженной аллергизацией организма.
Примерно к двадцатому дню болезни в лимфатических образованиях, печени, селезенке, костном мозге и других участках ретикулоэндотелиальной системы образуются гранулемы – узелки, состоящие из эпителиоидных и гигантских клеток с зоной некроза и фиброзом по периферии органов. В таких очагах бруцеллы располагаются преимущественно внутриклеточно. Иногда развиваются остеомиелит, менингит, холецистит.
Инкубационный период при бруцеллезе 1-6 недель. Начало заболевания постепенное: появляются слабость, недомогание, лихорадка, потливость. Обычно температура повышается во второй половине дня (ундулирующая лихорадка); падение температуры в ночное время сопровождается обильным потоотделением. Лихорадка длительная, сохраняющаяся месяцами (рис. 1). Самочувствие больных даже в период высокой температуры остается относительно хорошим (не соответствует объективным данным).
Клинические проявления бруцеллеза многообразны и зависят от того, какие органы и ткани вовлечены в инфекционный процесс. Чаще всего страдают лимфатическая, сосудистая, гепатолиенальная, нервная системы, а также опорно-двигательный аппарат.
Наблюдается увеличение лимфатических узлов и селезенки. Гепатит может сопровождаться развитием желтухи. Боли и расстройства движения, особенно в позвоночнике, указывают на развитие остеомиелита. Эти симптомы генерализованной бруцеллезной инфекции стихают в течение нескольких недель или месяцев, хотя локализованные поражения могут сохраняться очень долго.
После острой фазы может развиться хроническая стадия, характеризующаяся слабостью, острыми и ноющими болями, субфебрильной температурой, раздражительностью, невротическим состоянием.
Могут поражаться генеративные органы, наблюдаться прерывание беременности.
Летальность при бруцеллезе колеблется от 1 до 6 процентов. Прогноз для жизни обычно благоприятный, но значительная продолжительность болезни, обилие осложнений нередко приводят к утрате трудоспособности и стойкой инвалидности.
Иммунитет: Постинфекционный иммунитет перекрестный (против всех видов бруцелл), однако не абсолютный.
Диагностика:
Материалом для исследования при бруцеллезе у больных людей являются кровь (в некоторых случаях костный мозг), моча, грудное молоко, мокрота, спинномозговая жидкость и т.д.
Применяется бактериологический метод; первоначально исследуют кровь. Пробу крови засевают в объеме 5-10 мл в два флакона, содержащих по 50-100 мл бульона. Один из флаконов инкубируют в условиях с повышенным содержанием СО2 (для выделения B.abortus), другой – в обычных условиях. Посевы выдерживают в термостате при 37°С не менее месяца.
Если исследуемый материал загрязнен посторонней микрофлорой, единственным надежным методом исследования является биологический: заражение белых мышей или морских свинок и последующее выделение бруцелл из органов зараженных животных.
Бактериологический и биологический методы могут применяться лишь в лабораториях, предназначенных для диагностики особо опасных инфекций.
Наиболее распространенными методами в широкой медицинской практике являются серологические исследования. Используют микрометод реакции агглютинации на стекле (реакция Хеддльсона), развернутую реакцию агглютинации (реакция Райта), РНГА, РСК, люминесцентно-серологический метод, иммуноферментный метод и т.д.
При отрицательных результатах бактериологического и серологических исследований применяют кожную аллергическую пробу (проба Бюрне). Проба Бюрне обычно становится положительной к концу первого месяца заболевания у 70-85% пациентов. В качестве антигена применяют бруцеллин – протеиновый экстракт культуры бруцелл.
Лечение:
Для лечения применяют антибиотики (тетрациклин, левомицетин, ампициллин) в сочетании с введением лечебной вакцины (взвесь убитых бруцелл) или бруцеллина.
Профилактика
Основу профилактики составляют санитарно-ветеринарные, санитарно-гигиенические и противоэпидемические мероприятия (удаление из стада больных животных, обеззараживание молока кипячением или пастеризацией, вакцинация домашних животных, обеззараживание шкур, шерсти животных и т.д.).
Для специфической профилактики используют живую вакцину, приготовленную из штамма B.abortus. Вакцинация проводится только в очагах козье-овечьего бруцеллеза. Вводится вакцина накожно, однократно. Поствакцинальный иммунитет сохраняется в течение 10-12 месяцев. Вакцина обладает довольно выраженным аллергическим действием. Менее аллергенна химическая бруцеллезная вакцина, состоящая из антигенов клеточной стенки бруцелл.
