Взятие крови для общего клинического анализа крови производят путем укола в мякоть IV пальца левой руки или мочку уха. Для укола палец обрабатывают ватным шариком, смоченным раствором антисептика, чаще всего септоцида. Укол лучше производить сбоку, где более густая капиллярная сеть, на глубину 2-3 мм в зависимости от толщины кожи. Кровь из ранки должна вытекать свободно, так как при сильном надавливании на палец возможно примешивание тканевой жидкости, приводящее к искажению результатов.
Не рекомендуется брать кровь сразу после физической и умственной нагрузки, приема медикаментов, физиотерапевтических процедур, диагностических манипуляций. Необходимо производить забор крови натощак. Повторные исследования желательно проводить в одни и те же часы, поскольку морфологический состав крови подвержен колебаниям на протяжении суток.
Для исследования гемограммы используют пробирочный метод взятия крови. Точная дозировка крови и разводящих жидкостей достигается с помощью калиброванных пипеток и дозаторов.
Общий клинический анализ крови включает определение следующих компонентов:
1) количество гемоглобина;
2) количество эритроцитов;
3) индексы красной крови (цветовой показатель и среднее содержание гемоглобина в одном эритроците);
4) скорость оседания эритроцитов (СОЭ);
5) гематокритное число;
6) осмотическая резистентность эритроцитов и их диаметр;
7) количество ретикулоцитов;
8) количество лейкоцитов и лейкоцитарная формула;
9) количество тромбоцитов.
2. Методика определения концентрации гемоглобина, количества эритроцитов и ретикулоцитов. Расчет индексов красной крови: цветовой показатель и среднее содержание гемоглобина в одном эритроците. Диагностическое значение. Гематокритное число.
Предложено много методов определения концентрации гемоглобина. Важнейшие из этих методов – колориметрические. Чаще колориметрируют цветные производные гемоглобина: хлорид гематина, цианметгемоглобин, карбоксигемоглобин и др. Концентрацию гемоглобина измеряют фотоэлектроколориметрами, приборами ГФ-2 и ГФ-3, гемоглобинометрами при автоанализаторах.
Унифицированным является цианметгемоглобиновый фотометрический метод. Он основан на превращении гемоглобина в цианметгемоглобин при добавлении к крови реактива (раствора Драбкина), содержащего железосинеродистый калий и цианид калия. Концентрацию цианметгемоглобина измеряют фотометрически, а расчет количества гемоглобина производят по калибровочному графику.
Гематиновый метод Сали основан на превращении гемоглобина при добавлении к крови хлористоводородной кислоты в хлорид гематина (хлоргемин) коричневого цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию гемоглобина. В настоящее время этот метод не имеет широкого применения.
В норме концентрации гемоглобина составляет:
- у женщин 120 - 150 г/л;
- у мужчин 130— 160 г/л.
Увеличение концентрации гемоглобина наблюдается у людей, живущих в условиях высокогорья, при обезвоживании у работников горячих цехов, после обильной рвоты и при диарее, при массивных ожогах, при эритремии и др.
Уменьшение концентрации гемоглобина наблюдается при анемиях, а так же при обильном употреблении жидкости, гемодилюции лекарственными инфузионными средствами и др.
Определение количества эритроцитов крови выполняется следующими методами:
1. Подсчет эритроцитов в счетной камере с сеткой Горяева.
Принцип метода: в строго определенном объеме камеры подсчитывают под микроскопом клеточные элементы, а затем производят перерасчет полученного результата на 1 мкл крови. С целью уменьшения количества клеток, подлежащих подсчету, кровь предварительно разводят в смесителях или пробирках.
Оборудование и реактивы:
1) смесители (меланжеры) или пробирки для разведения крови;
2) 3 % раствор хлорида натрия или жидкость Гайема для разведения эритроцитов (ртути хлорид - 0,5 г; натрия сульфат - 5,0 г; натрия хлорид - 1,0 г; вода дистиллированная - до 200 мл);
3) счетная камера Горяева;
4) микроскоп.
Смесители представляют собой капиллярную пипетку с резервуаром, содержащим бусинку, способствующую смешиванию крови с жидкостью для разведения. На смесителе нанесены метки: одна - 0,5, другая - перед входом в резервуар - 1,0, третья - у выхода из ампулы - 101. При набирании крови в пипетку до метки 0,5 она будет разведена в 200 раз, до 1,0 - в 100 раз.
Счетная камера представляет собой стеклянную пластинку с выгравированной или наклеенной сеткой Горяева. Обычно на одной пластинке имеются две сетки, разделенные между собой глубокой канавкой, что позволяет использовать одну сетку для подсчета эритроцитов, а другую - для подсчета лейкоцитов. По краям сеток находятся возвышения, к ним притираются покровные стекла, которые образуют верхнюю границу камеры. Притирать покровные стекла нужно очень плотно до появления радужных колец (так называемых колец Ньютона), ибо только в этом случае будут соблюдены необходимые высота (1/10 мм) и объем счетной камеры. Сетка Горяева имеет 225 больших квадратов (15 х15), 25 из которых разделены на малые, по 16 в каждом. Каждая сторона малого квадрата равна 1/20 мм, а так как высота камеры составляет 0,1 мм, то объем счетной камеры, ограниченной одним малым квадратом, будет равен 1/4000 мм3.
Ход исследования: в сухую чистую пробирку или смеситель отмеривают раствор хлорида натрия или жидкость Гайема. Пипеткой от гемометра Сали набирают кровь из пальца, вытирают кончик пипетки марлей или фильтровальной бумагой, выдувают кровь на дно пробирки с жидкостью для разведения. Подготавливают камеру Горяева. Затем концом круглой стеклянной палочки или пастеровской пипеткой наносят каплю разведенной крови на среднюю пластинку камеры у края покровного стекла.
Интерпретация полученных данных. Подсчет эритроцитов производят спустя 1-2 мин после заполнения камеры (когда эритроциты осядут на дно камеры) при малом увеличении микроскопа (объектив 8х, окуляр - 10х или 15х) и при затемненном поле зрения (при опущенном конденсоре или прикрытой диафрагме). Считать эритроциты необходимо в 5 больших квадратах, т. е. в 80 маленьких, расположенных по диагонали. Подсчету подлежат все эритроциты, лежащие внутри малого квадрата, и те, которые находятся на левой и верхней линиях. Эритроциты, расположенные на правой и нижней линиях, не считают, так как они будут учтены в следующем квадрате.
Количество эритроцитов в 1 мкл (мм3) крови высчитывают по следующей формуле:
Х=(А х 4000 х В)/Б,
где X - количество форменных элементов в 1 мкл крови; А - количество форменных элементов, сосчитанных в определенном количестве малых квадратов (для эритроцитов - в 80); Б - количество сосчитанных малых квадратов (80); В - степень разведения крови (для подсчета эритроцитов -100 или 200); 4000 - величина, умножая на которую, мы получаем количество клеток в 1 мкл (1 мм3), так как объем 1 маленького квадрата равен 1/4000 мм.
Для перевода в систему СИ (пересчет на 1 л крови) полученную цифру умножают на 106 (или количество целых единиц умножают на 1012).
Методика подсчета эритроцитов в счетной камере достаточно точна (ошибка может достигать 2,5 %), но весьма трудоемка. Ошибки могут быть обусловлены: образованием сгустка, недостаточным количеством подсчитанных квадратов, несоблюдением условий, обеспечивающих правильную высоту счетной камеры (притирание покровных стекол без образования радужных колец), неравномерным заполнением камеры (образование пузырьков воздуха), подсчетом эритроцитов без выжидания 1-2 мин (эритроциты не успевают осесть и результат оказывается заниженным), плохо вымытыми смесителем и счетной камерой, недостаточной квалификацией лаборанта, выполняющего исследование.
2. Фотометрический метод подсчета количества эритроцитов – основан на фотометрическом измерении степени погашения света определенных длин волн взвесью эритроцитов. Процент задержанного света прямо пропорционален числу эритроцитов. Для этого используют приборы типа эритрогемометров и электрофотоколориметры.
3. Электронно-автоматический метод. Используются приборы автоматического счета частиц крови, работающие по импульсному и сцинтиляционному принципу (счетчики «Целлоскоп» и «Культер», автоанализаторы «Техникон»).
Нормальное количество эритроцитов:
- у женщин 3.7 – 4.7 х 1012/л;
- у мужчин 3,9 - 5,1 х 1012/л.
Увеличение количества эритроцитов наблюдается:
1) при эритремии (абсолютный первичный эритроцитоз);
2) при гипоксии: обструктивная вентиляционная недостаточность, при наличии альвеолярно-капиллярного блока – фиброзирующий альвеолит и легочные васкулиты, врожденные пороки сердца с шунтом справа налево и др;
3) при гемоглобинопатиях (наследственные заболевания, характеризующиеся наличием в эритроцитах аномальных гемоглобинов);
4) при вторичных абсолютных эритроцитозах, связанных с повышенной продукцией эритропоэтинов (рак почек, гидронефроз и поликистоз почек, рак печени и др.);
5) при вторичных абсолютных эритроцитозах, связанных с избытком адренокортикостероидов или андрогенов (феохромоцитома, синдром / болезнь Иценко-Кушинга, гиперальдостеронизм);
6) при относительных эритроцитозах вследствие обезвоживания, стрессов, алкоголизма, повышенной физической нагрузки, проживания в условиях высокогорья и др.
Уменьшение количества эритроцитов характерно для анемий различного происхождения. От истинной анемии, характеризующейся абсолютным уменьшением эритроцитарной массы, нужно отличать анемию (эритроцитопению) вследствие гидремии (снижение гематокрита из-за увеличения объема плазмы).
Уменьшение количества эритроцитов (анемия, эритроцитопения) наблюдается при постгеморрагических анемиях, анемиях вследствие недостаточного кровеобразования (железодефицитная, витамин-В12- и фолиеводефицитная), анемиях в результате усиленного распада эритроцитов (гемолитические), железоперераспределительных и метапластических (при опухолевых заболеваниях крови) анемиях и др.
Расчет индексов красной крови: цветовой показатель и среднее содержание гемоглобина в одном эритроците.
Под индексами красной крови понимают среднее содержание гемоглобина в одном эритроците и цветовой показатель.
Определение среднего содержания гемоглобина в одном эритроците производят делением концентрации гемоглобина на число эритроцитов в одинаковом объеме крови. В норме 1 эритроцит содержит 33 пг гемоглобина (допустимые колебания 27-33.4 пг).
Величину 33 пг условно принимают за единицу (норма содержания гемоглобина в одном эритроците) и обозначают как цветовой показатель.
Цветовой показатель отражает насыщение эритроцита гемоглобином.
Вычисление цветового показателя (ЦП) производят по формуле:
ГЕМОГЛОБИН (в г/л) х 3
ЦП = -------------------------------------------------------------------;
три первые цифры числа эритроцитов (в миллионах)
ГЕМОГЛОБИН (в г/%)
ЦП = -------------------------------------------------------------------;
две первые цифры числа эритроцитов (в миллионах)
ГЕМОГЛОБИН (в условных единицах)
ЦП = -------------------------------------------------------------------
две первые цифры числа эритроцитов (в миллионах)
В норме цветовой показатель равен 0,85 – 1,05.
Индексы красной крови важны для суждения о нормо-, гипер-, гипохромии эритроцитов.
Гиперхромия – увеличение среднего содержания гемоглобина в 1 эритроците, дающее цветовой показатель выше 1.05, зависит исключительно от увеличения объема эритроцитов, а не от повышенного насыщения их гемоглобином, так как нормальный эритроцит насыщен гемоглобином до предела. Гиперхромия характерна для мегалобластных анемий, обусловленных дефицитом витамина В12 и фолиевой кислоты.
Гипохромия – уменьшение среднего содержания гемоглобина в 1 эритроците, дающее ЦП ниже 0.85, может быть так же следствием уменьшения объема эритроцитов. Гипохромия служит истинным показателем или дефицита железа в организме, или железорефрактерности. Гипохромия наблюдается при хронических кровопотерях, железодефицитных и железорефрактерных анемиях, свинцовой интоксикации и др.
Нормохромия – это нормальное содержание гемоглобина в эритроците (ЦП -0,85-1,05). Нормохромные анемии развиваются при равномерном уменьшении содержания эритроцитов и количества гемоглобина и наблюдается в случаях острых кровопотерь, при гипопластической анемии, при гемолизе, сепсисе.
Гематокрит (гематокритное число) – дает представление о соотношении между объемом плазмы и объемом форменных элементов крови. Определяется с помощью следующих методов.
1. Метод центрифугирования в гематокритной трубке.
2. Электронно-автоматический метод (с помощью аппаратов «Целлоскоп» и «Культер»).
Нормальные величины гематокрита:
- у женщин 36-42%;
- у мужчин 40-48%.
Гематокритное число учитывается при диагностике полицитемических и олигоцитемических состояний.
Ретикулоциты – это молодые эритроциты, содержащие базофильную субстанцию в виде сеточки, представленную агрегированными рибосомами и митохондриями. Сеточка обнаруживается при прижизненной окраске мазков крови 1% раствором бриллианткрезил синего. Подсчет производится под иммерсионным объективом по отношению к 1000 эритроцитов.
В норме содержание ретикулоцитов в периферической крови составляет 2-10º/○○ (0,2-1,2%). Ретикулоцитоз отображает степень регенераторной способности костного мозга. При гемолизе, кровопотерях эритропоэз в нормальном костном мозге активизируется, и число ретикулоцитов в нем и в периферической крови возрастает. Отсутствие роста числа ретикулоцитов в выше указанных ситуациях свидетельствуют о пониженной функции костного мозга.
Ретикулоцитоз при отсутствии анемии говорит о скрытых, но хорошо компенсированных потерях крови. Высокий ретикулоцитоз наблюдается при адекватном лечении витамин-В12-дефицитной анемии.
