Микроскопирование дрожжей

Уметь:

Ø использовать лабораторное оборудование;

Ø определять основные группы микроорганизмов;

Ø проводить микробиологические исследования и давать оценку полученным

результатам.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 3

Тема: Выращивание микроорганизмов на питательных средах

Актуализируются в работе ПК и ОК:

ОК 1 - Понимать сущность и социальную значимость своей будущей профессии, проявлять к ней устойчивый интерес.

ОК 2 - Организовывать собственную деятельность, выбирать типовые методы и способы выполнения профессиональных задач, оценивать их эффективность и качество.

ОК 3 - Принимать решения в стандартных и нестандартных ситуациях и нести за них ответственность.

ОК 6 - Работать в коллективе и команде, эффективно общаться с коллегами, руководством, потребителями.

ОК 7 - Брать на себя ответственность за работу членов команды (подчиненных), результат выполнения заданий.

Цель: Ознакомиться с принципами приготовления питательных сред и методами выращивания микроорганизмов в лабораторных условиях Научиться производить посев на питательные среды.

Материально-техническое оснащение рабочего места обучающегося:

Рабочее место студента соответствует требованиям стандарта и БЖД

Оснащение:

· методические указания для выполнения лабораторной работы

· микроскоп лабораторный биологический,

· чашки Петри с МПА и выросшими на них микроорганизмами;

· предметные стекла, спиртовки, иммерсионное масло, фильтровальная бумага, краска, пробирки, колбы, пастеровские пипетки, бактериологические петли, шпатели, чашки Петри, вата, марля, ножницы.

Правила техники безопасности при выполнении работы:

При выполнении работы строго соблюдать правила техники безопасности.

Работа должна осуществляться в условиях стерильнос­ти - это основное правило техники безопасности. Выполнение микробиологических работ в условиях стерильности должно обеспечить предупреждение за­грязнения внешней среды и персонала микробами из исследовательского материала, среди которых могут оказаться и болезнетворные.

Студенты должны соблюдать правила личной гигиены и профилактики, бережно относиться к лабораторному оборудованию и аппаратуре, особенно к микроскопу. Чтобы предотвратить рассеивание инфицированным материалом во внешней среде необходимо строго соблюдать санитарные правила, действовать согласно инструкции.

При работе с культурами микроорганизмов необходимо пользоваться соответствующими инструментами. Соблюдать чистоту и опрятность, отработанные препараты живых микроорганизмов помещать в сосуд с дезинфицирующим раствором для обезвреживания.

По окончании занятий необходимо привести в порядок рабочий стол, протереть и убрать микроскоп, тщательно вымыть руки и снять халат.

Ход работы.

1. Ознакомление со свойствами и классификацией питательных сред.

2. Овладение техникой посевов микроорганизмов на питательные среды

3. Изучение культуральных свойств неизвестных бактерий, выращенных на поверхности МПА в чашках Петри.

Теоретические основы

Физиология микроорганизмов — это раздел микробиологии, изучающий процессы жизнедеятельности микробов. Особенности жизнедеятельности микроорганизмов, т. е. потребности в питательных веществах (тип питания), способ биологического окисления (тип дыхания), реакция клетки на воздействие различных факторов среды обитания, называются физиологическими свойствами.

Знание физиологических свойств микробов необходимо для понимания их расселения и поведения в природе, использования в народном хозяйстве и порче пищевых продуктов. Для исследования физиологических свойств микроорганизмы выращивают в лабораторных условиях.

Выращивание микроорганизмов в лабораторных условиях называются культивированием, а выращенные на питательной среде микробы —культурой.

Культуры, состоящие из различных видов микроорганизмов, называют смешанными; культуры, состоящие из одного вида микробов — чистыми.

При специальных способах посева, когда в питательную среду вносится одна клетка, в результате размножения ее образуется совокупность особей, которая называется клон. Если клон развивается на поверхности питательной среды, по мере роста числа особей он образует видимое невооруженным глазом скопление микробов, которое называется колонией.

Микроорганизмы одного вида, выделенные из определенного источника внешней среды (из организма человека, животного, пищевого продукта и т. д.), называют штаммом.

Питательные среды служат для выделения из исследуемого материала чистых культур микробов и изучения их свойств. Питательные среды являются основой бактериологических работ, нередко определяя своим качеством результаты исследований.

В состав сред, применяемых для выращивания бактерий, входят необходимые для построения белков цитоплазмы органогены' азот, углерод, водород, кислород; неорганические соединения, содержащие фосфор, калий, серу, натрий, магний, железо; микроэлементы: кобальт, йод, марганец, бор, цинк, молибден, медь и др. Все перечисленные элементы должны находиться в питательной среде в удобоусвояемом для данного микроорганизма соединении, причем требования различных микробов в этом отношении разнообразны.

Питательные вещества могут усваиваться микробами только при определенной реакции питательной среды, так как проницаемость оболочек микробных клеток изменяется в зависимости от рН среды. Потребность в питательных веществах и физических условиях у различных видов микробов неодинакова и этим исключается возможность создания универсальной питательной среды..

По консистенции различают плотные и жидкие питательные среды. Плотные питательные среды готовят из жидких посредством прибавления к ним клеевых веществ: агара и желатина. Агар-агар (по малайски —желе) — продукт растительного происхождения, добываемый из морских водорослей. В воде агар-агар растворяется при температуре 80—86°С, застудневает при 36—40°С. Желатин — белковое вещество животного происхождения Применение его как уплотнителя огоаничено из-за низкой (22— 27°С) температуры разжижения. Плотными средами являются, например, мясо-пептонный агар (МПА), сусло-агар (СА), мясо-пептонный желатин.

Для приготовления тщательных сред используют:

1. Продукты животного происхождения: мясо, молоко, яйца, кровь и т. д.

2. Продукты растительного происхождения: картофель и др.

3. Органические и неорганические соединения определенного состава.

Те среды, где используются натуральные продукты, называются естественными.

Синтетические питательные среды, составленные из химических соединений, называются искусственными

Питательные среды должны:

— содержать необходимые для питания микроба питательные вещества;

— иметь реакцию рН, оптимальную для выращиваемого вида микроба;

— иметь достаточную влажность, так как микробы питаются по законам диффузии и осмоса;

— быгь стерильными, обеспечивая тем самым возможность выращивания чистых культур микроорганизмов.

Питательные среды подразделяются на среды общего назначения и специальные

К первой группе относятся мясо-пептонные: агар, бульон, питательный желатин. Среды общего назначения (общеупотребительные) используют для выращивания многих патогенных микробов и применяют в качестве основы для приготовления специальных сред, добавляя к ним кровь, сахар, молоко, сыворотку и другие ингредиенты, необходимые для роста того или иного вида микроба.

К специальным питательным средам относятся элективные (избирательные) и дифференциально-диагностические питательные среды.

Элективные (избирательные) среды. Принцип их создания основан на удовлетворении основных биохимических и энергетических потребностей того вида микроба, для культивирования которого они предназначаются и менее пригодны и аи вовсе непригодны для развития других микробов.

Дифференциально-диагностические питательные среды используют для определения видовой принадлежности исследуемого микроба, основываясь на особенностях его обмена веществ. По своему назначению дифференциально-диагностические питательные среды разделяются на четыре основные группы:

1) для выявления протерлитической и гемолитической способности микробов, содержащие в своем составе белковые вещества: кровь, молоко, желатин, свернутую кровяную сыворотку и т. д;

2) с индифферентными химическими веществами, которые служат источником питания для одних видов микробов и не усваиваются другими;

3) с углеводами и многоатомными спиртами для обнаружения соответствующих ферментов;

4) для определения редуцирующей способности микробов. В настоящее время многие питательные среды изготавливают фабричным способом и выпускают в виде порошка.

Задание 1