1. На фиксированный мазок нанести ацетат синьки Нейссера на 2—3 мин.
2. Добавить раствор Люголя на 10—30 с.
3. Промыть препарат водой.
4. Докрасить водным раствором везувина или хризоиди-на в течение 0,5—1 мин.
5. Промыть препарат водой, высушить и микроскопировать.
Зерна волютина представляют собой включения полифосфатов, имеющие в отличие от цитоплазмы щелочную реакцию,
|
|
и поэтому избирательно воспринимают ацетат синьки, окрашиваясь в темно-синий цвет. Цитоплазма клетки, обладающая кислой реакцией, воспринимает щелочной краситель везувин и окрашивается в желтый цвет (рис. 2.2.4; на вклейке). Обнаружение макрокапсул по методу Бурри—Гинса
1. Смешать каплю взвеси микробных клеток с каплей туши и при помощи стекла со шлифованым краем сделать мазок таким же образом, как мазок из крови, высушить и фиксировать.
2. На мазок нанести водный раствор фуксина на 1—2 мин.
3. Промыть водой, высушить на воздухе и микроскопиро-вать.
Бактерии окрашиваются в красный цвет. Капсулы не окрашиваются анилиновыми красителями, остаются прозрачными и контрастно выделяются на черно-розовом фоне (рис. 2.2.5; на вклейке).
Рис.2.3.1. Актиномицеты.
Рис.2.3.2. Спирохеты, а — трепонемы; б — боррелии; в лептоспиры.
Тема 2.3. МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ
И УЛЬТРАСТРУКТУРА АКТИНОМИЦЕТОВ И СПИРОХЕТ
Введение. Актиномицеты (Actinomyces) относятся к порядку Actinomycetales, включающему семейства Actinomycetaceae, Strep-tomycetaceae и Nocardiaceae. Актиномицеты имеют нитевидную форму. Они способны к ветвлению и могут образовывать структуры, напоминающие мицелий одноклеточных грибов (рис. 2.3.1). Встречаются также палочко- и кокковидные формы. Нити имеют длину 100—600 мкм и толщину 0,2—1,2 мкм. Актиномицеты неподвижны, лишены выраженной капсулы, жгутиков и пилей. Как и другие бактерии, актиномицеты окрашиваются простыми методами или по методу Грама. Актиномицеты относятся к фирмикутным бактериям и окрашиваются грамположительно. В отличие от других бактерий они способны размножаться не только поперечным делением, но и спорами.
Спирохеты относятся к порядку Spirochaetales. Они представляют собой извитые подвижные бактерии. Патогенные спирохеты входят в семейство Spirochaetaceae и принадлежат к трем родам: Borrelia, Treponema и Leptospira. Их основные морфологические признаки представлены в табл. 2.3.1.
Клетка спирохеты имеет форму нити, закрученной в виде спирали. Клеточная стенка обладает строением, типичным для грациликутных бактерий. В периплазматическом пространстве располагаются сократительные фибриллы — эндофлагеллы, которые прикрепляются к полюсам клетки с обоих концов, оплетают тело бактерии по направлению к центру клетки, где они переплетаются между собой. Фибриллы обладают сокра-
тительной способностью и определяют спиральную форму и подвижность спирохет.
Патогенные спирохеты имеют длину 3—20 мкм и толщину 0,1—0,5 мкм. Представители отдельных родов различаются по размерам, числу и характеру завитков (см. рис. 2.3.2, табл. 2.3.1). Спирохеты плохо окрашиваются по методу Грама. Боррелии в отличие от трепонем и лептоспир окрашиваются анилиновыми красителями (фуксином). Морфологию трепонем и лептоспир изучают в нативных препаратах ("раздавленная" или "висячая" капля) с помощью темнопольного или фазово-контрастного методов, а также в мазках, окрашенных по методу Романовского—Гимзы или другими специальными методами.
Таблица 2.3.1. Морфологические признаки спирохет
| Род |
| Характер движения |
| Число и характер завитков |
Окраска по методу
Романовского—
Гимзы
Сине-фиолетовая
| Borrelia |
| 3—10, крупные, неравномерные |
Толчкообразное, сгибательно-по-ступательное
| Бледно-розовая |
| Treponema 8—12, мелкие, равномерные |
Плавное, сгиба-тельно-поступа-тельное
| Leptospira |
| Многочисленные первичные завитки, вторичные завитки в виде буквы S |
| Розово-сиреневатая |
Очень активное, вращательно-по-ступательное
А План
Программа
1. Определение формы актиномицетов в препарате, окрашенном по методу Грама.
2. Методы изучения морфологии спирохет с дифференциацией по морфологическим признакам.
3. Определение формы и подвижности спирохет в прижизненных препаратах.
4. Исследование спирохет в окрашенных препаратах.
5. Изучение электронограмм спирохет и спирилл.
Демонстрация
1. Препарат из чистой культуры актиномицетов. Окраска по методу Грама.
2. Подвижность лептоспир (темнопольная микроскопия).
3. Боррелии в препарате толстой капли крови (окраска по методу Романовского—Гимзы).
Задание студентам
1. Изучить морфологию актиномицетов в препарате. Зарисовать.
2. Изучить морфологию лептоспир с помощью метода темнопольной микроскопии. Зарисовать.
3. Изучить морфологию боррелии в препарате толстой капли крови. Зарисовать.
Методические указания
Морфологию спирохет изучают в нативных препаратах и в мазках, окрашенных по методу Романовского—Гимзы. Препараты исследуют с помощью темнопольной или фазово-кон-трастной микроскопии, наблюдая за активным и характерным движением спирохет и особенностями их формы.
Приготовление мазка из крови. На чистое обезжиренное стекло ближе к одному из его концов поместить каплю крови. Другое предметное стекло со шлифованым краем прижать под углом 45° к капле крови, а затем скользящим движением передвинуть его к другому концу нижнего стекла. При этом кровь распределится по предметному стеклу тонким слоем. Высушить препарат на воздухе, фиксировать в жидком фиксаторе (метиловый спирт или смесь этилового спирта и эфира).
Окраска препарата по методу Романовского — Гимзы (смесь метиленового синего, эозина и азура). На мазок нанести рабочий раствор красителя (2 капли красителя на 1 мл дистиллированной воды) на 10—20 мин. Затем препарат промыть водой и высушить на воздухе.
Боррелии — возбудители возвратного тифа (B.recurrentis) окрашиваются в фиолетовый, эритроциты крови — в розово-коричневый, ядра лейкоцитов — в фиолетовый цвет. Трепонемы окрашиваются в бледно-розовый, лептоспиры — в розово-сиреневатый цвет.
