Клонирования. На первом этапе клонировали двунитевую ДНК-копию

МРНК и расщеплением рестиктазами получали последовательность, коди-

Рующую всю аминокислотную последовательность гормона, кроме пер-

Вых 23 аминокислот. Далее клонировали синтетический полинуклеотид,

Соответствующий этим 23 аминокислотам со стартовым ANG кодоном в

Начале. Два полученных фрагмента соединяли и подстраивали к паре lac-

Промоторов и участку связывания рибосом. Сконструированный ген

трансплантировали в E. coli. Синтезированный в бактериях гормон обла-

Дал требуемой молекулярной массой, не был связан с каким-либо белком;

Его выход составлял около 100 000 молекул на клетку. Гормон, однако,

Содержал на N-конце полипептидной цепи дополнительный остаток ме-

Тионина; при удалении последнего выход гормона был низким.

В 1980 г. были получены доказательства того, что генноинженерный

Соматотропин обладает биологической активностью нативного гормона.

Клинические испытания препарата также прошли успешно. В 1982 г. гор-

Мон был получен также на основе сконструированной кишечной палочки

В Институте Пастера в Париже. Стоимость гормона к 1990 г. снизилась до

5 долларов/ед. В настоящее время его начинают применять в животновод-

Стве для стимулирования роста домашнего скота, удоев и др.

Получение интерферонов

Интерфероны – группа белков, способных продуцироваться в ядер-

Ных клетках позвоночных. Это мощные индуцибельные белки, являю-

Щиеся фактором неспецифической резистентности, поддерживающего

Гомеостаз организма. Система интерферонов обладает регуляторной

Функцией в организме, так как способна модифицировать различные

Биохимические процессы. Интерфероны позвоночных, в том числе че-

ловека, разделяют на три группы: α, β, γ, соответственно, лейкоцитар-

Ные, фибробластные и иммунные.

В конце 70-х гг. стала очевидной потенциальная значимость интерфе-

Ронов для медицины, в том числе профилактики онкологических заболе-

Ваний. Клинические испытания сдерживались отсутствием достаточных

Количеств интерферонов и высокой стоимостью препаратов, полученных

Традиционным способом (выделение из крови). Так, в 1978 г. для получе-

Ния 0.1 г чистого интерферона в Центральной лаборатории здравоохране-

ния Хельсинки (лаборатория – мировой лидер по производству интерфе-

Рона из лейкоцитов здоровых людей) получали при переработке 50 000 л

Крови. Полученное количество препарата оценочно могло обеспечить ле-

Чение против вирусной инфекции 10 000 случаев. Перспективы получения

Интерферонов связывали с генной инженерией.

В 1980 г. Гилберту и Вейссману в США удалось получить интерферон

В генетически сконструированной E. coli. Исходная трудность, с которой

они столкнулись, – низкий уровень мРНК в лейкоцитах, даже стимулиро-

Ванных заражением вирусом. При переработке 17 л крови удалось выде-

Лить мРНК и получить ДНК-копию. Последнюю встроили в плазмиду и

Клонировали в E. coli. Было испытано свыше 20 000 клонов. Отдельные

клоны были способны к синтезу интерферона, но с низким выходом, 1–2

Молекулы на клетку. Аналогичные исследования проводили в Японии,

Англии, Франции, России.

В 1980 г. были установлены нуклеотидные последовательности α- и β-

интерферонов: мРНК фибробластного интерферона состоит из 836 нук-

леотидов; из них 72 и 203 нуклеотида приходятся на 5’- и 3’-

Нетранслируемые области, 63 кодируют пептид, ответственный за секре-

Цию интерферона из клеток и 498 нуклеотидов кодируют 166 аминокис-

Лотных остатков собственно интерферона. После этого химическим син-

тезом были получены гены α- и β-интерферонов, которые клонировали в

E. coli. В 1981 г. была расшифрована нуклеотидная последовательность

Иммунного интерферона, существенно отличающегося от первых двух, но

Сравнимого по величине молекулы. Существенным моментом был полный