1 – А; 4 - В.
Краткие методические рекомендации к проведению занятия
В начале занятия проводятся тестовый контроль исходного уровня знаний студентов и его коррекция. Затем студенты приступают к выполнению лабораторной работы, используя при этом инструкцию.
После выполнения лабораторной работы необходимо оформить протокол, сделать выводы к работе, которые проверяет и контролирует преподаватель. Проводится анализ самостоятельной работы студентов и коррекция.
Инструкция к практическому занятию “Определение активности a-амилазы слюны»
Принцип метода: Метод основан на определении наименьшего количества амилазы (при максимальном разведении слюны), полностью расщепляющего весь добавленный крахмал. Амилазная активность слюны выражается количеством 1,0 % раствора крахмала в миллилитрах, которое расщепляется 1мл неразведенной слюны при температуре 38 С в течение 30 мин. В норме амилазная активность слюны равна 160-320. Амилазная активность обозначается А 38/30`. Этот метод широко используется для определения амилазной активности мочи.
Материальное обеспечение: 0,1% раствор крахмала; 0,1% раствор йода в 0,2% растворе йодида калия; термостат; пипетки вместимостью от 1 до 10 мл.
Ход работы
1. В мерную пробирку соберите 1 мл слюны и разведите ее дистиллированной водой в соотношении 1:9.
2. В предварительно пронумерованных десять пробирок добавьте по 1 мл воды, в первую пробирку добавьте также и 1 мл разведенной в 10 раз слюны.
3. Содержимое первуй пробирки перемешайте, наберите 1 мл смеси в пипетку и перенесите эту смесь во вторую пробирку.
4. Содержимое второй пробирки перемешайте, наберите 1 мл смеси и перенесите ее в третью пробирку, и так далее до десятой пробирки.
5. Из десятой пробирки отберите 1 мл смеси и вылейте.
6. Во все пробирки добавьте по 1 мл воды и по 2 мл 0,1% раствора крахмала, перемешйте.
7. Пробирки поместите в термостат при 38 С на 30 минут.
8. Через 30 минут охладите пробирки под водопроводной водой, добавьте в каждую по 1 капле 0,1% раствора йода и перемешайте. При реакции с йодом жидкость в пробирках окрашивается в желтый, розовый и фиолетовый цвета.
9. Полученные данные занесите в таблицу.
10. Отметьте последнюю пробирку с желтой окраской, что свидетельствует о том, что гидролиз крахмала прошел в ней полностью и сделайте расчет.
| Разведение слюны | |||||||||
| 1:20 | 1:40 | 1:80 | 1:160 | 1:320 | 1:640 | 1:1280 | 1:2560 | 1:5120 | 1:10240 | |
| Пробирки | ||||||||||
| 1-я | 2-я | 3-я | 4-я | 5-я | 6-я | 7-я | 8-я | 9-я | 10-я | |
| Ок-рас-ка с рас-тво-ром йода |
Расчет: Отметив пробирку, где гидролиз крахмала прошел полностью при наименьшем количестве фермента, в данной пробирке рассчитайте амилазную активность слюны по следующей пропорции:
А мл слюны расщепило 2 мл 0,1 % раствора крахмала,
1 мл слюны расщепил х мл раствора крахмала,
где А – количество неразведенной слюны.
Например, желтоватая окраска появилась в 4-й пробирке, где слюна была разведена в 160 раз; 1/160 мл слюны расщепила 2 мл 0,1% раствора крахмала; 1 мл неразведенной слюны расщепил х мл 0,1% раствора крахмала:
Х= 2х1х160 =320мл 0,1% раствора крахмала. Х= 1
Следовательно, амилазная активность слюны А 38 °/ 30¢ равна 320.
ВЫВОДЫ:
Подпись преподавателя:
Приложение 1
Граф логической структуры
¯
