Принцип работы: О протекании реакции гликогенолиза судят по образованию молочной кислоты и по убыли неорганического фосфата после инкубации гомогената ткани с гликогеном.
Материальное обеспечение:
1.Гомогенат мышц
2.Фосфатный буферный раствор, рН 7,4
3.Раствор гликогена 1%
4.Физиологическтй раствор
5.Раствор фенола 1%
6.Раствор хлорного железа 1%
7.Раствор молибденовокислого аммония
8.Раствор аскорбиновой кислоты, пипетки, химические стаканы объемом до 50 мл, пробирки.
Ход работы: В два химических стаканчика внести по 5 мл мышечного гомогената, добавить 5 мл фосфатного буферного раствора, рН 7,4. В первый стаканчик добавить 5 мл 1% раствора гликогена, во второй- 5 мл физиологического раствора. Стаканчики поставить на инкубацию в термостат на 15 мин при 37 С. После инкубации содержимое отфильтровать и определить качественно наличие молочной кислоты и неорганического фосфата в контрольной и опытной пробирках.
А. Определение молочной кислоты.
Ход работы: В 2-х пробирках готовят реактив Уффельмана: к 1 мл 1% раствора фенола добавить 0,2 мл 1% раствора хлорного железа. Образуется фенолят железа фиолетового цвета. К полученному раствору добавляют по каплям исследуемый раствор(в 1-ю –контроль, во 2-ю -опыт). При наличии молочной кислоты окраска переходит в желто-зеленую вследствие образования молочнокислого железа.
Б. Определение неорганического фосфата.
Ход работы: К 2 мл исследуемого раствора добавить 1 мл молибденовокислого аммония и 1 мл аскорбиновой кислоты. В результате образования фосфорномолибденовой сини появляется окраска, интенсивность которой зависит от количества неорганического фосфата в исследуемом растворе.
Результаты работы занести в таблицу.
| № | Ферментативный препарат | Субстрат | Реакция на молочную кислоту | Реакция на неорганический фосфат |
| 1. 2. | Мышечный экстракт Мышечный экстракт | Гликоген Физиологичес- кий раствор |
ВЫВОДЫ:
Подпись преподавателя:
Приложение 1
Граф логической структуры
ТЕМА 1.10. ИССЛЕДОВАНИЕ АЭРОБНОГО ОКИСЛЕНИЯ ГЛЮКОЗЫ. ПЕНТОЗОФОСФАТНЫЙ ПУТЬ ПРЕОБРАЗОВАНИЯ ГЛЮКОЗЫ
Актуальность темы
В условиях нормального клеточного дыхания аэробное окисление глюкозы является основным источником энергии для большинства тканей организма человека с точки зрения энергетической ценности.
Вместе с этим существует альтернативный механизм метаболизма глюкозы - пентозофосфатный, в результате функционирования которого образуется другой тип метаболической энергии - восстановленный НАДФ+ (НАДФН), который используется в разных реакциях восстановительного биосинтеза.
Основным промежуточным продуктом углеводного обмена является пируват, который в анаэробных условиях (гипоксия)восстанавливается в лактат, в аэробных условиях- превращается в ацетил-КоА, окисляемый в ЦТК до углекислого газа и воды. Он также может быть использован для синтеза глюкозы путем глюконеогенеза, что обеспечивает нормальную концентрацию глюкозы в крови. Изучение этих процессов позволит понять причины возникновения, симптоматику многочисленных патологических состояний, связанных с указанными превращениями углеводов. Эти знания будут необходимы при изучении разделов биохимии «Кровь», «Нервная ткань», «Мышечная ткань», «Соединительная ткань», «Печень» и разделов патологической физиологии, патологической анатомии, фармакологии, эндокринологии, терапии.
Теперь ознакомьтесь с целями занятия.
Общая цель
Уметь интерпретировать механизм аэробного окисления углеводов в организме человека по промежуточному продукту этого процесса для оценки энергетического обеспечения организма в норме и патологии.
Конкретные цели: Цели исходного уровня:
Уметь:
| 1.Интерпретировать наличие в моче пировиноградной кислоты как промежуточного продукта окисления глюкозы в тканях. | 1.Интерпретировать количество пировиноградной кислоты в биологических жидкостях фотоколориметрическим методом с использованием калибровочного графика (кафедра медицинской и фармацевтической химии). |
| 2.Анализировать содержание пирувата в моче для оценки аэробного окисления углеводов в норме и патологии. | 2.Анализировать структуру кетокислот и проводить качественные реакции на кетокислоты (кафедра медицинской и фармацевтической химии) |
| 3.Анализировать информацию о протекании аэробного окисления глюкозы в тканях для оценки энергетического обеспечения организма в норме и патологии. | 3.Анализировать структуру АТФ (кафедра медицинской и фармацевтической химии). |
Для проверки исходного уровня Вам предлагается выполнить ряд заданий.
