Агглютинины. Реакция агглютинации, ее разновидности. Реакция гемагглютинации.

Агглютинация – склеивание AТ образующие с АГ иммуный комплекс, который склеивается и выпадает в осадок, при этом АГ корпускулярный, крупнодисперсный. Реакция агглютинации (РА) протекает в две фазы:

1. Специфическая - невидимая - АГ+АТ.

2. Неспецифическая - видимая – проявление реакции.

Положительный признак РА – прозрачная надосадочная жидкость и при стряхивании видна змейка или хлопья в виде снега. РА используется в бактериологическом методе для поиска антигенов и в серологическом методе для поиска антител.

РПГА (РНГА) при этом АГ или AT адсорбированы на эритроцитах которые гемагглютинируются между собой посредством образования иммуных комплексов. РПГА более специфична и чувствительна т.к. наглядна даже при небольшом титре: потому используют в диагностике вирусов, инфекционных хламидиозов. риккетсиозов.

РГА - при добавлении к исследуемому материалу где есть вирус, обладающий ферментом гемагглютинином и эритроцитов, происходит их склеивание. Используется для обнаружения вирусов.

 

19. Реакция преципитации: методы постановки, применение в медицинской практике: иммуноэлектрофорез. Иммуноферментный анализ. Иммуноблотинг.

Преципитация – осаждение. Преципитины – антитела, осаждающие антигены. При этом антигены – мелкодисперсные, растворимые или отдельные молекулы.

Реакция преципитации на агаре (геле) используется для определения токсичности дифтерийных палочек. На агаре (1) раскладывают диски фильтровальной бумаги смоченной антитоксической сывороткой (2) посевают исследуемую культуру (3) при продукции токсина она образует иммунные комплексы с антителами и осаждается в виде линии преципитации (4).

Иммуный электрофорез - методом электрофореза разгоняются антигены в геле, затем обрабтываются сывороткой.

Иммуноферментный анализ (ИФА). Используется как для поиска антител, так и антигенов для этого используют различные тест системы. Принцип метода: на полиэстероловой основе (1) фиксируется в заводских условиях антиген или антитело (2) в зависимости от того что ищем. Затем добавляют исследуемые сыворотки с антигеном или антителами (3) (на одном планшете могут диагностироваться 96 человек), промывают (если иммуиый комплекс не образовался, антигены или антитела исследуемого материала вымываются (4), а если образовался то не вымывается(5)). Добавляют антиглобулиновую сыворотку меченную ферментом пероксидазой (6) промывают. Добавляют субстрат - перекись водорода (7) и индикатор (8), если произойдет изменение цвета в лунке говорят о положительном результате, если цвет не изменился то отрицательный результат.

Иммунный блотинг. Методом элекрофореза разгоняют белки АГ, помещают на нитроцелюлозную полоску (стрип). затем опускают стрип в сыворотку, добавляют антиглобулиновую сыворотку меченную ферментом, затем субстрат и индикатор. Делают проявление полосок соответствующих образованию иммунных комплексов. Иммунный блот - экспертный (подтверждающий) метод.

 

Лизины. Реакция бактериолиза и гемолиза. Реакция связывания комплемента и ее использование в диагностике инфекционных болезней.

Лизины – антитела вызывающие в присутствии комплемента лизис микроорганизмов эритроцитов.

РСК (реакция связывания комплемента) – используется как в первом, так и во втором принципе для поиска антигена или антител. Наиболее специфична и чувствительна как РПГА.

Механизм: 5 компонентов и 3 этапа:

1 этап - учавствует поисковая система AГ-AT.

2 этап - в пробирку добавляют комплемент.

3 этап – добавляют индикаторную гемосистему – эритроциты барана (антиген) и гемолитическую сыворотку (антитела). Результат: если поисковая система не специфична комплемент останется свбодным и свяжется с индикаторной гемосистемой, произойдет гемолиз, результат отрицательный. Если поисковая система специфична гемолиза нет: результат положительный.