( ), .
, , (, ). .
, . .
, .
. , / , , .
. . , , , , , , . , , -. , () , , . .
1. .
2. (.1.):
1
-
50 | ||
10 - | 1 | 5 |
10 | 0.2 | 1 |
1 (50 ) | 1 | 1 |
2 (50 ) | 1 | 1 |
Taq-- | 1.25 | 0.5 |
- | 0.1 1 | |
- | 50 |
3. :
, 94 4 ;
, 94 20-60 ;
, 37-68 20-60 ; -
, 72 20-60 ; 20-40
72 5-15 .
:
1. -, . 95C 3 . , . - .
2. 2535. : ( , ), ( , ).
|
|
3. , .
4. :
a) , Taq-. 20C , +4C ;
) , . 70C 20C , +4C .
) , . 70C 20C , +4C . - Taq-.
5. , :
20C. , ;
(~4C) .
6. 50 . . . - 10 , - 25 .
7. , , . . , , .
8. dNTP 250 . dNTP 15 350 .
9. Taq- - 0.5 - 5 /. . , .
10. , . - , - . - - 25-150 .
11. , (, , ), . , .
12. <1000 .. 2%- . 1000 2000 .. - 1.5%- . - 1%- 0.7%- . , .. ( ).
13. , , . .
|
|
14. , , . : [] → [+4] → [-20] → [-70]. , , .
-. . , . , , , ( ). . N-- (). . , (), . , , . . , . . , , 100% , , , . , - . , . , ( 25-30 ). . . ( ). (). , , , , , , . 0,1 HCl, , , -2, - .
, , , , -.
( 2).