Метод основан на способности глюкозы в безбелковой вытяжке в щелочной среде при нагревании восстанавливать красную кровяную соль (гексацианоферрат калия (III) – K3Fe(CN)6) в желтую кровяную соль (гексацианоферрат калия (II) – K4Fe(CN)6). Уравнение реакции имеет вид:
Вследствие обратимости этой реакции гексацианоферрат калия (III) под действием сульфата цинка переводят в нерастворимую соль – цинкгексацианоферрат калия (III):
Гексацианоферрат калия (III) берут в избытке и неиспользованный в реакции его остаток определяют йодометрически в кислой среде (например, в присутствии уксусной кислоты), титруя количество образовавшегося йода тиосульфатом натрия
В качестве индикатора на молекулярный йод используют крахмал.
Содержание глюкозы рассчитывают по специальной таблице 5, которая составлена так, что в ней определенному объему тиосульфата натрия, затраченного на титрование йода, а, следовательно, избытка гексацианоферрата калия (III), соответствует то число миллиграммов глюкозы, которое прореагировало в реакции.
Материалы и реактивы: вата гигроскопическая для фильтрования растворов, солодовая вытяжка, 0,1 моль/л раствор гидроксида калия, 0,45%-ный раствор сульфата цинка, щелочной раствор гексацианоферрата калия (III) (1,65 г K3Fe(CN)6 и 10.6 г безводного карбоната натрия растворяют в дистиллированной воде до объема 1 л), раствор сульфата цинка в растворе хлорида натрия (10г сульфата цинка и 50г хлорида натрия растворяют в дистиллированной воде и доводят объем до 200мл), раствор иодида калия (5г иодида калия растворяют в 25 мл дистиллированной воды), 0,05 моль/л раствор тиосульфата, 3%-ый раствор уксусной кислоты, 1%-ый раствор крахмала.
Приготовление солодовой вытяжки: 1 г солода растолочь тщательно в ступке и добавить 5 мл дистиллированной воды, профильтровать.
Оборудование: стеклянные палочки, пробирки, колбы конические (объем 50 мл), воронки стеклянные, пипетки, капельницы, водяная баня, бюретки, штатив для пробирок, чашки, часы.
Ход работы. В две пробирки помешают по 1 мл раствора гидроксида калия. В одну из них (проба) добавляют также 0,1 мл вытяжки, а в другую (контроль) 0,1 мл дистиллированной воды. Затем вносят по 5 мл 0,45%-ного раствора сульфата цинка и после перемешивания ставят на 2…3 минуты на кипящую водяную баню. После этого смесь фильтруют в конической колбе через ватный тампон, вложенный в воронку. Воронку и ватный тампон промывают горячей дистиллированной водой три раза по 2 мл, не наливая новой порции воды до полного оттока предыдущей. К фильтрату в каждой колбе приливают по 2 мл щелочного раствора гексацианоферрата калия (III), смеси кипятят на водяной бане в течение 15 мин. Затем в каждую колбу добавляют по 2,6 мл раствора сульфата цинка в растворе хлорида натрия, по 0,4 мл раствора йодида калия и после перемешивания, по 2 мл раствора уксусной кислоты и по 3 капли раствора крахмала. Смесь титруют 0,05 моль/л раствором тиосульфата натрия до исчезновения окраски, образовавшейся при добавлении крахмала. По затраченным на титрование пробы и контроля объемам тиосульфата натрия, используя таблицу 5, определяют массу глюкозы и вычисляют разность между массой глюкозы в контроле и пробе.
Массовую концентрацию глюкозы (мг/мл) рассчитывают по формуле:
,
где А и В – масса глюкозы, определенная по таблице в пробе и контроле;
V – объем вытяжки, взятый для анализа.
