Кафедра БТ
Лабораторная работа по предмету “Биохимия”.
Углеводы.
Выполнил: студент гр. ТБПиВ-91,
Анохин И. С.
Проверила: доц. Мезенцева Н.И.
Цель работы: Освоить количественные методы определения глюкозы и лактозы в исследуемых веществах.
Теоретическая часть
Определение глюкозы с помощью реакции восстановления оксида меди в гемиоксид
В основе метода лежит способность солей меди (II) в определенных условиях количественно окислять глюкозу по реакции Троммера.
В реакции Троммера происходит образование как альдоновых кислот, так и гидроксида меди (II), что указывает на отсутствие количественной связи между глюкозой и гемиоксидом меди. Однако если к реакционной смеси добавляют сегнетову соль, то образуется комплекс, в котором медь реагирует с глюкозой в стехиометрическом соотношении.
Количество закиси меди (Cu2O), эквивалентное окисленной глюкозе, определяют йодометрическим методом:
.
Эта реакция в присутствии солей щавелевой или винной кислот протекает практически до конца.
Количество йода в излишке, которое не прореагировало с гемиоксидом меди, можно определить титрованием тиосульфатом натрия (индикатор – раствор крахмала)
Материалы и реактивы: исследуемый раствор глюкозы (1…4 мг/мл), реактив Фелинга I и II (для приготовления раствора I берут 200 г сегнетовой соли и 150 г гидроксида натрия растворяют в дистиллированной воде до объема 1 литр; раствор II готовят из перекристаллизованного сульфата меди растворяют в воде 40 г на 1 литр), насыщенный раствор щавелевой кислоты, 0,05 моль/л раствор йода, 0,05 моль/л раствор тиосульфата натрия, 1%-ный раствор крахмала.
Оборудование: стеклянные палочки, пипетки, конические колбы (объем 50 мл), капельницы, водяная баня, бюретки, часы.
Ход работы. В две колбы помещают по 5 мл реактива Фелинга I и II. В одну из колб (проба) добавляют 10 мл исследуемого раствора глюкозы, а в другую (контроль) – 10 мл дистиллированной воды. Содержимое обеих колб нагревают до кипения, кипятят 5 мин, и затем охлаждают. После этого в обе колбы наливают по 10 мл насыщенного раствора щавелевой кислоты, по 10 мл йода и после перемешивания отстаивают в течении 5 мин. По истечению этого времени в колбы вносят по 5 капель раствора крахмала и титруют раствором тиосульфата до исчезновения окраски, образовавшейся после добавления крахмала.
Массовую концентрацию глюкозы в исследуемом растворе (мг/мл) рассчитывают по формуле:
,
где А и В – объем раствора тиосульфата натрия, затраченного на титрование пробы и контроля соответственно;
f – коэффициент поправки на титр 0,05 моль/л раствора тиосульфата натрия;
Q – масса глюкозы (3,52 мг), эквивалентная 1 мл 0,05 моль/л раствора тиосульфата натрия;
V0 – общий объем пробы;
V1 – объем исследуемого раствора, взятого до анализа.
