Определение годности крови к переливанию.

При визуальном контроле необходимо отметить:

· правильность паспортизации (наличие этикетки с номером, даты заготовки, обозначения группы крови и резус принадлежности, наименования консерванта, Ф.И.О. донора, наименования учреждения-заготовителя, подпись врача);

· срок годности обозначен на этикетке рядом с датой заготовки;

· герметичность упаковки. Недопустимо малейшее нарушение ее целостности, в том числе, следов прокалывания крышки флакона иглой и подтекания.

Кровь должна быть разделена на 3 слоя:

· внизу красные эритроциты;

· выше – узкая серая полоска лейкоцитов и тромбоцитов;

· над ними – желтая прозрачная плазма.

Трехслойность характерна только для цельной крови, хранящейся в стеклянных флаконах.

Плазма должна быть прозрачной, не содержащей пленок, хлопьев, сгустков, не иметь красной окраски (гемолиз). Плазма может быть непрозрачна при хиллезной крови (высокое содержание нейтральных жиров). При нагревании до 37С^о становиться прозрачной.

Определение группы крови.

Проводят при температуре +15⁰С - +25⁰С по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам:

· под соответствующими обозначениями группы крови на тарелку наносят стандартные изогемагглютинирующие сыворотки I (бесцветная), II (голубая), III (розовая) групп крови (титр 1:32) в объеме 0,1 мл (одна большая капля около 1 см в диаметре);

· наносят две серии сывороток каждой группы;

· шесть капель исследуемой крови (величиной примерно с булавочную головку) по 0,01 мл;

· последовательно переносят сухой стеклянной палочкой на пластину (тарелку) в шесть точек, каждую рядом с каплей стандартной сыворотки (соотношение кровь: сыворотка равно 1:10);

· осторожно перемешивают разными палочками (или уголками предметных стекол);

· после перемешивания тарелку периодически покачивают;

· агглютинация начинается в течение первых 10-30 сек., однако наблюдают до 5 минут ввиду возможности поздней агглютинации;

· в те капли, где агглютинация произошла, добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия (проверка на ложную агглютинацию).

Оценка результата:

· все три сыворотки в обеих сериях не дают агглютинацию – I (0) группа крови;

· реакция отрицательна с сыворотками II (А) группы и положительна с I (0) и III (В) группами - II (А) группа крови;

· реакция отрицательна с сыворотками III (В) группы и положительна с I (0) и II (А) группами – III (В) группа крови;

· реакция во всех шести сыворотках положительна – IV (AB) группа крови. Необходима проверка с сывороткой IV(AB) группы.

По стандартным изогемагглютинирующим сывороткам и стандартным эритроцитам (перекрестный способ):

· кровь берут в сухую пробирку (из вены), центрифугируют или оставляют в покое на 20-30 мин. для разделения на сыворотку и эритроциты;

· на маркированную тарелку пипеткой в 6 ячеек наносят по одной большой капле сыворотки исследуемой крови из пробирки (0,1 мл), а рядом с ними – по одной малой капле (0,01 мл) стандартных эритроцитов I(0), II(А), III(В) групп по две серии;

· дальнейшие мероприятия проводятся аналогично методу с использованием стандартных изогемагглютинирующих сывороток. Реакция со стандартными сыворотками проводится параллельно.

Оценка результатов (оценивают обе реакции):

· отсутствие агглютинации с эритроцитами I(0)группы и наличие ее с эритроцитами II(А) и III(В) групп – кровь I(0) группы;

· отсутствие агглютинации с эритроцитами I(0) и II(А) групп и наличие ее с эритроцитами III(В) группы – кровь II(А) группы;

· отсутствие агглютинации с эритроцитами I(0) и III(В) групп и наличие ее с эритроцитами II(А) группы – кровь III(В) группы;

· отсутствие агглютинации с эритроцитами всех трех групп – кровь IV(АВ) группы.

С помощью моноклональных антител (цоликлонов):

· нанести цоликлоны анти-А и анти-В на белый планшет по одной большой капле (0,1мл) под соответствующими надписями;

· рядом нанести по одной малой капле (0,01мл) исследуемой крови;

· перемешать и наблюдать за реакцией в течение 2-3 мин.

Оценка результатов:

· отсутствие агглютинации с обеими цоликлонами – кровь I(0)группы;

· наличие агглютинации с цоликлоном анти-А и отсутствие с анти-В – кровь II(А) группы;

· наличие агглютинации с цоликлоном анти-В и отсутствие с анти-А – кровь III(В) группы;

· агглютинация с обеими цоликлонами – кровь IV(АВ) группы.

Рис. 28. Методика определения Рис. 29. Интерпретация данных при определении

группы крови. групп крови.

Проведение пробы на индивидуальную совместимость по системе АВО и резус – фактору.

Проба на индивидуальную совместимость по системе АВ0:

· на чашку Петри наносят крупную каплю (0,1мл) сыворотки крови реципиента и малую каплю (0,01мл) крови донора из флакона;

· смешивают их между собой, покачивая чашку Петри;

· проба проводиться при 15-25С^о, результаты оценивают через 5 мин.

Отсутствие агглютинации эритроцитов донора свидетельствует о совместимости крови донора и реципиента по системе АВ0.

Проба на индивидуальную совместимость по резус-фактору - проводится по трем вариантам:

Проба с использованием водной бани:

Техника проведения пробы аналогична пробе на индивидуальную совместимость (описана выше), только после смешивания крови с плазмой чашка Петри помещается на водяную баню при температуре 42-45⁰С. Оценка результатов производится через 5-10 мин. Если происходит агглютинация, то кровь несовместима в отношении резус-фактора.

Проба с использованием 33% раствора полиглюкина - реакция в центрифужной пробирке без подогрева в течение 5 мин:

· на дно пробирки вносят 2 капли сыворотки реципиента, 1 каплю крови донора и 1 каплю 33% раствора полиглюкина;

· содержимое перемешивают, вращая пробирку вокруг оси в течение 5 мин;

· добавляют 3-4 мл физиологического раствора и перемешивают не взбалтывая.

Наличие агглютинации эритроцитов свидетельствует о несовместимости крови донора и реципиента по резус-фактору.

Проба с использованием 10% желатина:

· на дно пробирки помещают 1 каплю эритроцитов донора, отмытых десятикратным объемом физ. раствора;

· добавляют 2 капли сыворотки реципиента и 2 капли, подогретого до разжижения, 10% раствора желатина;

· перемешивают и греют на водяной бане при 46-48^оС 10 мин;

· добавляют 6-8 мл физ. раствора, перемешивают не взбалтывая.

Наличие агглютинации свидетельствует о несовместимости крови донора и реципиента.