Дослід 2. Кількісне визначення молочної кислоти в сироватці крові за методом Бюхнера.

Молочна кислота в організмі є кінцевим продуктом гліколізу і глікогенолізу – анаеробних процесів окиснення глюкози та глікогену. Значна кількість молочної кислоти утворюється в м’язах, поступає в кров, переноситься до серцевого м’яза та в печінку, де окиснюється.

Принцип методу. Молочна кислота при нагріванні з концентрованою сульфатною кислотою перетворюється в оцтовий альдегід, який при взаємодії з гідрохіноном утворює сполуку червоно-коричневого кольору. Кількість молочної кислоти визначають колориметрично на ФЕКу при синьому світлофільтрі (l = 380 нм).

Матеріальне забезпечення: сироватка крові, 5 % розчин метафосфорної кислоти, 10 % розчин міді сульфату, кальцію гідроксид в порошку, концентрована сульфатна кислота, 20 % розчин гідрохінону, стандартний розчин молочної кислоти, дистильована вода, пробірки з притертими корками на 15 мл, скляні лійки, скляні палички, фільтри, водяна баня, газовий пальник, ФЕК.

Хід роботи. У дві сухі пробірки наливають по 6 мл дистильованої води. Потім в першу додають 1 мл стандартного розчину молочної кислоти, в другу – 1 мл сироватки крові. Для осадження білків вносять в кожну пробірку по 1 мл метафосфорної кислоти, струшують та залишають на кілька хвилин, після чого відфільтровують. До фільтратів додають по 1 мл 10 % розчину міді сульфату та по 0,5 г кальцію гідроксиду. Проби перемішують скляними паличками, через 5 хв відфільтровують. Відмірюють по 1 мл фільтрату в пробірки з притертими корками, додають по 0,1 мл 10 % розчину міді сульфату та по 4 мл концентрованої сульфатної кислоти. Пробірки ставлять у киплячу водяну баню на 1,5 хв. Після охолодження додають по 0,1 мл 20 % спиртового розчину гідрохінону, добре перемішують та кип’ятять 15 хв. Пробірки охолоджують та колориметрують при синьому світлофільтрі (l = 380 нм).

Розрахунки: Концентрацію молочної кислоти розраховують за формулою:

С_СТАНД. · А_{ДОСЛІДУ}

С =

А_СТАНД,

де С – концентрація молочної кислоти в сироватці крові, ммоль/л.

С_СТАНД. – концентрація молочної кислоти в стандартному розчині.

А_СТАНД. – оптична густина стандартного розчину молочної кислоти.

А_{ДОСЛІДУ} – оптична густина дослідної проби.

Оцінити отриманий результат. Зробити висновок.

Клініко-діагностичне значення. Концентрація в крові здорової людини молочної кислоти – 1 – 2 ммоль/л. Збільшення вмісту молочної кислоти може бути пов’язане з виконанням людиною інтенсивної м’язової праці за короткий проміжок часу без достатнього поступлення кисню. При цьому не проходить в достатній мірі окисне декарбоксилування пірувату до ацетил-КоА, а тільки утворення лактату. Останній може використатися у відновному періоді при достатньому поступленні кисню. Збільшення молочної кислоти спостерігається при гострому гнійному запальному уражені тканин, важкій анемії, епілепсії, тетанії, правці, гіпоксії, пов’язаній з серцевою та легеневою недостатністю, злоякісних новоутвореннях, захворюваннях печінки (гострих гепатитах, цирозі печінки), цукровому діабеті, нирковій недостатності, гострому септичному ендокардиті, поліомієліті, лейкозах, інтенсивних і тривалих м’язових навантаженнях та ін.

Для більшості наведених станів (лактатацидоз) збільшується співвідношення лактат / ПВК, найчастіше воно становить 10:1.