Принцип метода ИФА. Применение ИФА для определения концентрации иммуноглобулинов, цитокинов, растворимых форм рецепторов и др.

1.Иммунная система - это целостная морфофункциональная система организма, представляющая собой совокупность специализированных лимфоидных органов и тканей, которые осуществляют контроль за антигенным постоянством внутренней среды и объединены путями миграции и рециркуляции лимфоцитов.

В структурном отношении в иммунной системе можно выделить 3 уровня: органный, клеточный и молекулярный.

Органный уровень: Представлен центральными(первичными) и периферическими(вторичными) органами иммунитета. Центральные лимфоидные органы служат основным местом развития лимфоцитов. У млекопит. и человека существует 2 центральных органа: костный мозг и тимус. В костном мозге образуются В-лимфоциты, и он является центральным органом системы гуморального иммунитета, а в тимусе происходит образование Т-лимфоцитов, центральный орган клеточного иммунитета.

Костный мозг - служит основным источником общих клеток-предшественниц всех клеток крови- полипотентных стволовых кроветворных клеток (ППСК). Из ППСК образуются клетки всех ростков кроветворения: эритроидный, миелоидный, приводящий к образованию нейтрофилов, моноцитов, базофилов, эозинофилов, мегакариоцитарный - формирующий тромбоциты и лимфоидный, образующий Т и В-лимфоциты.

Тимус - является важным эндокринным органом, он оказывает регулирующее влияние на иммуногенез. Причем гормоны тимуса влияют на процессы дифференцировки лимфоцитов как внутри самого тимуса, так и на расстоянии, регулируя окончательное созревание Т-лимфоцитов в периферических лимфоидных органах. Таким образом в центральных органах иммунной системы происходит образование Т и В-лимфоцитов и их антиненнезависимая дифференцировка. Главным итогом которой является формирование клонов лимфоцитов.

К периферическим органам относятся: селезенка, лимфатические узлы, пейеровы бляшки кишечника, аппендикс, миндалины, аденоиды,. В них лимфоциты заселяют тимусзависимые, и тимуснезависимые зоны. В периферических органах в условиях контакта с антигенами происходит окончательное созревание лимфоцитов - их антигензависимая дифференцировка, в результате которой образуются зрелые иммунокомпетентные лимфоциты, осуществляющие иммунный ответ против соответствующих антигенов.

Клеточный уровень: клетки иммунной системы делятся на 2 группы

1) это лимфоциты(Т и В-лимфоциты разной степени зрелости, плазматические клетки, нулевые лимфоциты NK и К клетки.

2) антигенпредставляющие клетки(макрофаги, дендритные клетки, В-лимфоциты). Кроме того, большую роль в созревании и регуляции функций иммунокомпетентных клеток играют клетки микроокружения - клетки стромы (клетки эпителия и фибробласты, синтезирующие коллагеновые и эластические волокна).

Молекулярный уровень. 1)Основу составляют иммуноглобулины, синтезируемые В-лимфоцитами и гены контролирующие их синтез. Иммуноглобулины или антитела - это продукты гуморального иммунного ответа, они представляют собой глобулины, специфически реагирующие с антигеном, вызвавшим их образование. Существует 5 классов - IgA,IgE,IgM,IgG,IgD.

2)Медиаторы, с помощью которых иммунокомпетентные клетки участвуют в индукции, регуляции, и осуществлении иммунного ответа. Эти медиаторы, опосредующие межклеточные взаимодействия, называют цитокинами. Цитокины это низкомолекулярные белки, лишенные специфичности в отношении антигенов и обусловливающие межклеточные коммуникации при гемопоэзе, воспалении, иммунном ответе. Цитокины действуют на основе рецепторного механизма.

3) Гены основного комплекса гистосовместимости. HLA. Эти гены контролируют синтез антигенов гистосовместимости - гликопротеидов, содержащихся на поверхности всех ядросодержащих клеток организма и играющих важную роль в распознавании антигенов и индукции иммунологических реакций.

4) Кластеры дифференцировки, применяют для обозначения поверхностных маркерных белков субпопуляций лимфоцитов.

5) Молекулы адгезии: Имеется несколько семейств молекул адгезии: интегрины, селектины, муцины или васкулярные адрессины

6) Антигенраспознающие рецепторы лимфоцитов. У В-лимфоцитов это иммуноглобулины. У Т-лимфоцитов Т клеточный рецептор.

7) Гормоны тимуса

8) Миелопептиды костного мозга - они участвуют в дифференцировке В-лимфоцитов.

2. Система клеточного иммунитета включает тимус, периферические органы (Т-зависимые зоны), различные функциональные субпопуляции Т-лимфоцитов(хелперы, киллеры, супрессоры), и цитокины.

Основные функции Т-системы иммунитета

1) Главная функция связана с обеспечением клеточной формы иммунного ответа: Т-лифоциты оказывают цитотоксическое действие на генетически чужеродные клетки. Кроме того, Т-лимфоциты индуцируют фагоцитарный тип ответа на определенные разновидности антигенов.

2) Т-система играет важную роль в процессе распознавания большинства антигенов и в индукции как клеточного, так и гуморального иммунного ответа.

3) Играет роль в регуляции иммунного ответа. В этом процессе в первую очередь участвуют Т-хелперы и Т-супрессоры

4) Участвует в формировании и поддержании иммунологической толерантности - специфической иммунологической ареактивности, в первую очередь к собственным антигенам организма.

5) Зрелые эффекторные Т-лимфоциты осуществляют также функцию иммунологической памяти - способности к быстрому ответу при повторном контакте организма с соответствующим антигеном.

Дифференцировка Т-лимфоцитов.

Атигеннезависимая дифференцировка протекает в тимусе, она включает: проникновение предшественников Т- лифоцитов в тимус, пролиферацию тимоцитов, формирование антигенраспознающих рецепторов, положительную и отрицательную селекцию клонов Т- лимфоцитов. В процессе антигензависимой дифференцировке вышедшие из тимуса функционально незрелые лимфоциты, встречаясь с соответствующим антигеном, распознают его в кооперации с антигенпредставляющими клетками и получив ряд необходимых стимулов, размножаются и дифференцируются в зрелые эффекторные Т- лимфоциты. Предшественники Т-лимфоцитов, образовавшиеся в костном мозге, мигрируют в тимус и заселяют его корковую зону. В коре тимуса образуются незрелые Т-лимфоциты. Этапы внутритимусной дифференцировки от пТ до более зрелых Т-лимфоцитов характеризуется изменением экспрессии фенотипических Т-клеточных маркеров. Основными из них являются поверхностные CD антигены. Т-лимфоциты подвергаются апоптозу на всех этапах созревания в тимусе в результате отсутствия необходимых сигналов в виде межклеточных контактов.

Антигензависимая дифференцировка. Т- лимфоциты, образовавшиеся в тимусе, покидают этот орган и с током крови мигрируют в периферические органы иммунной системы, где заселяют тимусзависимые зоны. В периферических органах происходит встреча наивных Т-лимфоцитов с антигенами и их антигензависимая дифференцировка. Она включает 4 этапа: Распознавание антигена функционально незрелыми Т-лимфоцитами. Их ответная реакция на антиген в виде пролиферации и дифференцировки до зрелых эффекторных клеток. Участие в собственно эффекторной фазе иммунного ответа -нейтрализация и уничтожение антигена. Формирование Т-клеток памяти.

3. Иммуноферментный анализ. Метод основан на специфическом связывании антитела с антигеном. В нем используют ферментную метку (пероксидазу хрена, щелочная фосфатаза, глюкозидаза). Количество меченых антител или антигенов, вступивших в реакцию определяют на основании изменения окраски субстрата под влиянием этого фермента. Аналитической мишенью для антител ИФА могут быть иммуноглобулины, гормоны, транспортные белки, липопротеины, гликопротеины. В основе ИФА лежат два биологических феномена - высокая специфичность антител, и многократное усиление химических реакций ферментами. В процессе разработки метода были созданы гетерологичные (твердофазные) и гомогенные варианты ИФА. Гомогенный вариант метода используют для определения низкомолекулярных веществ.При гетерогенном варианте антиген или антитело им в тв фе

БИЛЕТ