Ћекции.ќрг


ѕоиск:




 атегории:

јстрономи€
Ѕиологи€
√еографи€
ƒругие €зыки
»нтернет
»нформатика
»стори€
 ультура
Ћитература
Ћогика
ћатематика
ћедицина
ћеханика
ќхрана труда
ѕедагогика
ѕолитика
ѕраво
ѕсихологи€
–елиги€
–иторика
—оциологи€
—порт
—троительство
“ехнологи€
“ранспорт
‘изика
‘илософи€
‘инансы
’ими€
Ёкологи€
Ёкономика
Ёлектроника

 

 

 

 


ќпределение фагоцитарной активности нейтрофилов и макрофагов

1. ƒл€ получени€ нейтрофилов мышам ввод€т внутрибрюшинно 3-4 мл 2-3% раствора пептона и через 2 ч животных умерщвл€ют с помощью хлороформа. »х вскрывают в асептических услови€х. »з брюшной полости с помощью шприца или пастеровской пипетки отсасывают жидкость, перенос€т ее в силиконизированные центрифужные пробирки.

2. ѕосле центрифугировани€ пробирок в течение 10 мин при 1000 об/мин осадок ресуспендируют в среде 199, подсчитывают число клеток в камере √ор€ева и довод€т до концентрации 1-2х106/мл.

3.   клеткам добавл€ют равный объем бактерий (чаще всего Staphylococcus aureus, не содержащий белка ј) или опсонизированного зимозана в соотношении 1:10 и инкубируют при 37 ∞— в течение 30 мин.

4. Ѕактерии предварительно должны быть опсонизированы мышиной сывороткой. ќпсонизацию провод€т в течение 10 мин при температуре 37 ∞— с последующим отмыванием.

 

5. ѕосле инкубации готов€т мазок на предметном стекле, фиксируют его метанолом 20 мин и крас€т краской –омановского-√имзы в течение 30-40 мин.

6. ”чет результатов осуществл€етс€ микроскопически. ¬ мазке при увеличении х90 с иммерсионной системой подсчитывают фагоцитарный индекс (процент фагоцитирующих нейтрофилов) и фагоцитарное число (количество поглощенных бактерии на 1 нейтрофил).

ƒл€ изучени€ фагоцитарной активности макрофагов на 3-4-е сутки после введени€ раствора пептона мышей умерщвл€ют (в соответствии с современными нормами биоэтики), вскрывают в асептических услови€х и ввод€т внутрибрюшинно 5-8 мл среды 199, содержащей 10% сыворотки эмбриона коровы. ѕосле легкого массажа брюшной полости жидкость отсасывают. ѕолость можно промывать средой 199 несколько раз, объедин€€ в одну все полученные порции. ƒалее исследование ведетс€ так же, как опыты с нейтрофилами (рис. 3.3, см. также цв. вклейку).

–ис. 3.3. ‘агоцитоз зимозана макрофагом (конфокальна€ микроскопи€ и лазерна€ сканирующа€ конфокальна€ микроскопи€): а - интактный макрофаг; б - макрофаг, захвативший зимозан (красный)



<== предыдуща€ лекци€ | следующа€ лекци€ ==>
 омплементзависима€ цитотоксичность | ћетод оценки хемотаксиса нейтрофилов с использованием камеры Ѕойдена
ѕоделитьс€ с друзь€ми:


ƒата добавлени€: 2015-02-12; ћы поможем в написании ваших работ!; просмотров: 443 | Ќарушение авторских прав


ѕоиск на сайте:

Ћучшие изречени€:

Ќаглость Ц это ругатьс€ с преподавателем по поводу четверки, хот€ перед экзаменом уверен, что не знаешь даже на два. © Ќеизвестно
==> читать все изречени€...

1623 - | 1290 -


© 2015-2024 lektsii.org -  онтакты - ѕоследнее добавление

√ен: 0.009 с.