Особенности абсорбционной спектроскопии для биологических макромолекул.

Параметры, измеряемые в абсорбционной спектроскопии.

На рис. 4 показаны спектры, снятые в видимой и УФ-областях для двух биологических молекул [4]. Обычно определяются величины D или e. Длина волны, соответствующая максимуму поглощения, называется l_макс, и именно при этой длине волны обычно определяют e. Некоторые полосы поглощения состоят из многочисленных пиков, и часто регистрируют длины волн, соответствующие пикам, имеющим меньшие молярные коэффициенты погашения. Эти длины волн иногда также называют l_макс или указывают, что вещество имеет максимумы поглощения при l₁, l₂,… l_n. Иногда измеряют ширину полосы.

В табл. 2 приведен список величин l_макс и e хромофоров, часто встречающихся в биологических объектах [4]

Электронные переходы полипептидных и полинуклеотидных цепей и, тем самым, белков и нуклеиновых кислот расположены в УФ-области спектра. Полосы поглощения пептидной связи — СО — NН — лежат в области 185 - 240 нм, здесь же и в более коротковолновой области расположены полосы поглощения алифатических боковых цепей аминокислотных остатков. Ароматические остатки Трп, Фен, Тир имеют полосы поглощения в обл. 280 нм. Азотистые основания в нуклеиновых кислотах поглощают свет в области 260 нм. Таким образом, белки и нуклеиновые кислоты бесцветны, они не поглощают видимый свет.

Таблица 2. Максимумы поглощения и молярные коэффициенты погашения e различных веществ при нейтральных значениях рН, используемых для биологических исследований.

Рис 4. Сравнение спектров поглощения двух биологических молекул: флавинмононуклеотида (а) и фикоцианина (б). Спектры можно использовать для идентификации соединения.